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  小鼠降钙素ELISA定量检测试剂盒

小鼠降钙素ELISA定量检测试剂盒

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产品报价:
2600元
公司名称:
上海恒远ELISA试剂盒总...
所在地区:
上海市
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产品型号:
更新时间:
2015-09-07 14:39
厂商性质:
代理商
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本网采购热线:0571-87759942

“小鼠降钙素ELISA定量检测试剂盒”专业提供,有96T/48T两种规格,包括96/48孔酶标包被板、酶标试剂、样品稀释液、显色剂AB液、标准品、浓缩洗涤液,封板膜,说明书等。

小鼠降钙素ELISA定量检测试剂盒 详细信息

小鼠降钙素ELISA定量检测试剂盒性能参数

使用前彻底阅读说明书。本酶联免疫试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。

【工作原理】

。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA)。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBSTBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBSTBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

【每套试剂盒中内容】(96T)

材料 数量

标准品 96T(2vial)

预包被抗体的96孔板 96T8×12

生物素标记人ANG抗体 96T (1:100)

ABC(亲和素-过氧化物酶复合物) 96T (1:100)

样品稀释液 96T×2

抗体稀释液 96T×1

ABC稀释液 96T×1

TMB显色液A 96T×1

TMB显色液B 96T×1

TMB终止液 96T×1

ELISA专用洗涤液 96T×1(1:25)

小鼠降钙素ELISA定量检测试剂盒需要而未提供的试剂和器材】

1 37℃恒温箱。

2 标准规格酶标仪。

3 自动洗板机。

4 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。

5 蒸馏水,容量瓶等

6 干净的试管和Eppendof管。

小鼠降钙素ELISA定量检测试剂盒注意事项】

1. -20℃取出的试剂盒,最好在4℃解冻过夜。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀,避免解冻时出现的分层,否则会出现浓度不均一的现象。

2. 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。

3. 配制各种试剂时,切记混匀!

4. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。

5. 建议所有标准品、样本都做双份检测。

6. 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活!

7. 为免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和试管。

【洗板方法】

手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的PBSTBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

小鼠降钙素ELISA定量检测试剂盒样品的准备和保存】

样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。

血清——用干净试管收集血液,室温凝固2小时或4℃过夜,离心1000×g 10分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

【样品稀释的一般原则】

用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。

【试剂的准备和保存】

A. 标准品的稀释和使用:在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液,彻底溶解后做倍比稀释。

8稀释后的标准品在2小时内使用。

B 生物素标记抗体工作液:在使用前2小时内准备。

1 根据每孔需要0.1ml计算总的用量(实际配制时应多配制0.1-0.2ml)。

2 10ul生物素标记抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

C 亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)工作液的准备:在使用前1小时内准备。

1 根据每孔需要0.1ml计算总的用量(实配时应多配制0.1-0.2ml)。

2 10ul亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

D. TMB显色工作液的准备:在使用之前30分钟,按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比例配制TMB显色工作液。

小鼠降钙素ELISA定量检测试剂盒操作程序】

1 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。

2 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。

3 酶标板加上盖,37℃反应90分钟。

4 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。

5 将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。

6 0.01M TBS0.01M PBS洗涤3次,每次浸泡1分钟左右。

7 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。

8 0.01M TBS0.01M PBS洗涤5次,每次浸泡1-2分钟左右。

9 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液,37℃避光反应,反应过程中,要经常的观察,当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔差别不明显时,即可加入TMB终止液0.1ml/孔。(显色反应最长不要超过30分钟)。

10 用酶标仪在450nm测定O.D.值。

11 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍,其实际浓度应该×N

小鼠降钙素ELISA定量检测试剂盒】操作步骤

(1)使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
(2)根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
(3)加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
(4)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
(5)每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
(6)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
(7)每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
(8)取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
(9)在450nm波长处测定各孔的OD值。


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