50T 嗉囊食通虫探针法荧光定量PCR试剂盒

​样品要求及注意事项：
1、 如果提供实验材料，实验材料必须保证新鲜，请您采样后立刻放入液氮中速冻或加入样稳定剂，并用干冰运输。
2、 如果样品可以用Trigol法提总RNA ，也可以将样品研磨后放在 Trigol中，动植物组织 ： 50～100mg/mlTrigol，贴壁细胞：10cm2/mlTrigol，悬浮细胞：5×106动植物，酵母细胞或细菌细胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我们要对您提供的材料进行评估。
4、 实时荧光定量PCR服务您一定要提供样品及要扩增基因的详细信息。

嗉囊食通虫探针法荧光定量PCR试剂盒运输及保存：低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。在专门的区域操作。

储存条件：
14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，产品仅用于科研请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
相对定量简介：
分析方法： ①双标曲法 ②2 － △Ct ③2 － △△Ct ④Pfaffi法
①双标准曲线法简介
公式：
优点：分析简单，实验优化简单
缺点：对每一个基因，每一轮实验都必需做标准曲线；必需有固定的标准品做标准曲线；这些标准品并不代表样品扩增的真实状态应用：基因表达调控研究中与*的两种相对定量方法之一

实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：
(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。

Oxalacetic acid草酰5克BR

Oxacillin sodium salt唑素1克43000～200000，粉末,5条带

o-Vanillin邻香兰素5克LR，80%

OVA卵清白蛋白100克生物技术级，200u/mg，液体

o-Toluic acid2-基1克超纯，99%

OTAC硬脂基三基化铵5克色谱用，36～50目

Osmium锇100毫克BR，40%

Orotic acid4-羧5克AR，99.5%

Orcein苔红素500毫克AR，85%

Orange IV四号橙5克超纯，99%

Orange G6金橙G1克超纯，

Orange Ⅱ性橙II25毫克BR，99%

Orange Ⅰ金橙I10毫克BR，80%

Oracet blue B沃来西脱蓝B5克BS

o-Phthalic acid邻酞250毫克超纯，99.5%

落新妇苷  英文名称：Astilbin  号：29838-67-3  规格：20mg

莽草  英文名称：Shikimic acid  号：138-59-0  规格：20mg

木糖醇  英文名称：Xylitol  号：87-99-0  规格：20mg

木犀草苷  英文名称：Cynaroside  号：1268798  规格：20mg

木犀草素  英文名称：Luteolin  号：491-70-3  规格：20mg

木犀草素-5-O-葡萄糖苷  英文名称：Luteolin-5-O-glucoside  号：20344-46-1  规格：10mg

马钱苷  英文名称：Loganin  号：1852-94-2  规格：20mg

马钱苷  英文名称：Loganic acid  号：22255-40-9  规格：20mg

蒙花苷  英文名称：Linarin  号：480-36-4  规格：20mg

麦角甾苷  英文名称：Verbascoside  号：61276-17-3  规格：20mg
嗉囊食通虫探针法荧光定量PCR试剂盒Venlainehydrochloride　盐酸文拉法辛（标准品）　规格：ples,2-3mm

Venlainehydrochloride　盐酸文拉法辛　规格：ples,3-5mm

ProoporphyrinIX　原卟啉IX　规格：ples,3-5mm

Ropivacainemesyla　甲磺酸罗哌卡因（标准品）　规格：pH指示剂

Ropivacainemesyla　甲磺酸罗哌卡因　规格：pH指示剂

Alkyldimehylbenzylammoniumchloride　苯扎氯铵（标准品）　规格：pH指示剂

Alkyldimehylbenzylammoniumchloride　苯扎氯铵（标准品）　规格：poncy>765µgoferyhromycin(C37H67NO13)permg,USP35

Neosigminemehylsulfa　甲硫酸新斯的明(标准品)　规格：poncy>877Upermg

Dipoassiumglycyrrhizina　甘草酸二钾（标准品）　规格：poncy>900ug/mg,BR

Nimesulide　尼美舒利（标准品）　规格：Poncy>960mg,JP

OxybuyninHCl　盐酸奥昔布宁（标准品）　规格：poncy>980ug/mg,BR

Ozagr　奥扎格雷（标准品）　规格：puriy>97%,BR

BendazacL-lysine　苄氨酸　规格：Puriy>97%,Poncy920ug/mg,USP

BendazacL-lysine　苄氨酸（标准品）　规格：Puriy>98%,Poncy≥900μg/mg,USPgrade

5-Aminosalicylicacid　5-氨基水杨酸,美沙拉秦(标准品)　规格：Puriy>98%,分子生物学级