50T 啮蚀艾肯菌探针法荧光定量PCR试剂盒

使用方法：
一、样品采集：
1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行。
2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。
3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DN段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
参数规格：

产品名称：啮蚀艾肯菌探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Eikenella corrodens
货号：CP914286
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。

原理:
啮蚀艾肯菌探针法荧光定量PCR试剂盒所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，产品仅用于科研Z后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
检测方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。
SYBR定量PCR扩增荧光曲线图
PCR产物熔解曲线图
2.TaqMan探针法：
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成*同步。
特点优势：
    1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到。
    2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为。
    3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
    4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
    5.   优势1：序列资源丰富，除TIANDZ公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
    6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
荧光定量PCR实验步骤：
①产品仅用于科研取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。

以下是啮蚀艾肯菌探针法荧光定量PCR试剂盒的相关产品：
Powder3-Aceoxy-8(17),13E-labdadien-15-oic acid中文名：性状：Powder纯度：98.0%

PowderMonomehyl kolava中文名：性状：Powder纯度：98.0%

Powderen-17-Hydroxykauran-3-one中文名：性状：Powder纯度：98.0%

Powder15,16-Di-O-aceyldaruoside中文名：性状：Powder纯度：98.0%

PowderHardwickiic acid中文名：性状：Powder纯度：97.0%

Powder9β-Hydroxydaruigenol中文名：性状：Powder纯度：96.0%

Crys.en-kaurane-17,19-dioic acid中文名：性状：Crys.纯度：%

PowderKirenol中文名：奇壬醇性状：Powder纯度：98.0%

Powder16-Epiabbeokuone中文名：性状：Powder纯度：98.0%

PowderEnmein中文名：延命素性状：Powder纯度：98.0%

PowderCarpalasionin中文名：性状：Powder纯度：98.0%

PowderExcisanin A中文名：性状：Powder纯度：%

PowderNorcaesalpinin E中文名：性状：Powder纯度：%

Powderinospinoside C中文名：性状：Powder纯度：%

Powder7-O-Aceylbonduclpin C中文名：性状：Powder纯度：%

PowderBonduclpin D中文名：性状：Powder纯度：%

Powder12-Aceoxyabieic acid中文名：性状：Powder纯度：97.5%
啮蚀艾肯菌探针法荧光定量PCR试剂盒PungiolideA　辛辣内酯A（标准品）　规格：BS,用于生物学染色

JaropholoneB　麻枫树酚酮B（标准品）　规格：BS,用于生物学染色

3β-aceoxy-eupha-7,25-dien-24(R)-ol　3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24(R)-醇（标准品）　规格：BSGrade

11-hydroxy-sugiol　11-羟基柳杉酚（标准品）　规格：BS级,干品含量>50%

L-(+)-Lacicacid　L-乳酸(标准品)　规格：BS生物染色级

BroussoneineA　构树碱A（标准品）　规格：Cefmenoxime≥93%,BR

Oleanolicacid-3-O-β-D-glucopyranosyl(1→2)-α-L-arabinopyranoside　Oleanolicacid-3-O-β-D-glucopyranosyl(1→2)-α-L-arabinopyranoside　规格：Cefsulodine>864μg/mg,BR

SapindosideA　SapindosideA　规格：Conn96.0-102.0%,BR

Cabozaninib(S)-mala(BMS907351-(S)-mala)　卡博替尼苹果酸盐;XL184(S)-mala　规格：CP

PresapogeninCP4　PresapogeninCP4　规格：CP

12-O-iglylphorbol-13–isobuyra　12-O-iglylphorbol-13–isobuyra　规格：CP

Phorbol12-myrisa13-acea　佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯　规格：CP

Gambogicacid　藤黄酸(标准品)　规格：CP

schisanhenol　五味子酚（标准品）　规格：CP

FMoc-yr(3,5-I2)-OH　FMOC-3,5-二碘-L-酪氨酸　规格：CP