收到产品后的使用说明

收到产品后请严格按照以下要求进行操作：

1.客户在收到瓶装细胞后，先观察培养瓶是否完好，培养液是否外渗，培养液是否混浊，若出现破裂、渗液、培养液混浊等问题，请在收到细胞后的当天与我们的销售或技shu支cai联xi，我们会及时处理(联xi方式详见页脚)。

2.细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满新鲜的*培养液(内含细胞培养的血清含量和双抗)，封好瓶口是我们正常运输细胞的方法。细胞出库前都是处于无菌状态，并且生长良好，我们也会对出库细胞进行拍照留档。（建议客户在收到我们的细胞时将培养液拍张照片，观察培养液的颜色以及是否漏液，观察细胞时请拍100X、200X 各2-3 张照片进行留存，方便后期细胞状态的对比，拍摄的照片应当清晰。）

3.客户在收到贴壁瓶装细胞后不开封，先将培养瓶外表面用75%酒精擦拭干净， 镜检细胞贴壁情况。若贴壁良好，请将细胞整瓶放于培养箱稳定1-2H 后拿出，瓶盖开启前请将培养瓶瓶口再次消毒、过火，再将多余培养液抽出进行继续培养，或直接进行

细胞传代(消化、传代步骤详见细胞使用说明书)；若贴壁细胞有部分细胞悬浮，请先将细胞整瓶放于培养箱稳定1-2H 后拿出，瓶盖开启前请将培养瓶瓶口再次消毒、过火，将培养液抽出，依次离心(1000rmp 5min)将悬浮细胞收集后放回原瓶进行过夜培养，并次日观察贴壁情况。如细胞仍不能贴壁， 请用台盼蓝染色鉴定细胞活力，证实细胞无活力，请将细胞拍照(多倍数多视野) 及染色照片发送至技shu支chi的邮xiang，我们会尽快处理。(以上仅为贴壁细胞处理方法)。

4.客户在收到悬浮瓶装细胞后不开封，先将培养瓶外表面用酒精擦拭干净，镜检细胞状态。若状态良好，请将细胞整瓶放于培养箱稳定1-2H 后拿出，瓶盖开启前请将培养瓶瓶口再次消毒、过火，将整瓶细胞悬液分别离心(1000rmp 5min)后收集于离心管中，视其离心后的细胞量进行放回培养或分瓶培养。(以上仅为悬浮细胞处理方法)。

5.客户在收到半悬浮瓶装细胞后不开封，先将培养瓶外表面用酒精擦拭干净，镜检细胞状态。若状态良好，请将细胞整瓶放于培养箱稳定1-2H 后拿出，瓶盖开启前请将培养瓶瓶口再次消毒、过火， 将整瓶细胞悬液中的上层悬浮细胞离心(1000rmp 5min)

后收集于离心管中，重悬细胞后放回原瓶与贴壁细胞共同培养至传代。重悬上层悬浮细胞时必须保持下层贴壁细胞的营养条件，防止贴壁细胞缺乏营养。(以上仅为半悬浮细胞处理方法)。

6.若客户收到1.8ml 离心管常温细胞，收到细胞后观察是否管裂、漏液、污染， 若有以上任何一种现象，请立即拍照后联xi我men。若无以上现象，请用75% 酒精对离心管进行消毒后放到操作台内，严格无菌操作，过火打开管盖，将管中的血清细胞轻轻吹

打几下， 取出后放入15ml 离心管中， 加入双倍或3 倍的*培养液1000rmp/5min离心，弃上清重悬后与对应的*培养液混匀，加入到培养瓶中过夜培养，第二天观察细胞状态和密度。若密度未达85%则继续培养， 若达85%以上则可直接进行传代。

收到细胞过夜培养24h 后发现细胞污染或者状态不佳，必须在发现问题的当天即刻向我们销售人员反馈。(以上仅为血清运输细胞处理方法)。

7.若客户收到冻存管细胞，请尽快复苏。复苏方法：1、37°水浴晃动直至融化（不要超过一分钟），移至15ml 离心管，另加入3-5 倍*培养液，1000rmp

5min，弃上清，放入25cm2 瓶中培养，第二天拍照留存有效信息。2、37°水浴晃动直至融化（不要超过一分钟），直接放进加有6-8ml 培养基的25cm2 瓶中培养，16 小时之后必须换液并拍照留存有效信息。

8.传代注意事项
胰酶消化的过程至关重要。消化过度细胞会粘连拉丝，严重影响细胞活性和后期状态；消化不*则细胞难以从瓶壁自行脱落，反复对细胞表面进行吹打会损伤细胞活性，导致细胞后期状态差、增值能力低下以及细胞形态发生改变。影响消化的因素有很多，主

要包括胰酶溶液的活性（配置条件、低温保存时间长短、是否反复冻融，解冻后的存放时间及温度等）、消化细胞时的温度（建议在37°培养箱中消化）、胰酶所加的量（以T25 为例，一个T25 加1ml 胰酶）、细胞的密度（同株细胞不同密度下胰酶对细胞的消化时间也不同，密度稀消化时间快，密度大消化时间相对较慢）等。不同细胞对胰酶的敏感性也不同，对于新购买的细胞，建议客

户用含0.25EDTA 的胰酶消化液先培养箱持续消化1-2min，镜下观察细胞是否变圆，直至细胞*脱落或者轻拍瓶壁*脱落。记录*佳消化时间， 下一次操作参考之前的记录来控制时间即可。

9.客户收到细胞时无异常，请在显微镜下观察细胞密度，如贴壁细胞密度未超过85%则继续培养，超过85%时，请按照细胞使用说明书进行传代培养；如为悬浮细胞和半悬浮细胞，具体操作请按照细胞使用说明书进行操作。

10.我们公司认为细胞购买者或使用者均有细胞培养经验，客户收到细胞，原瓶里的培养液可以重新收集使用（仅适用于近距离运输的客户）。在次消化传瓶时，我们建议客户留部分细胞继续使用我们的培养液进行培养，另外一部分细胞客户可使用自

己的培养液培养，这样可减少由于细胞不适应培养环境而导致的细胞培养问题，并且能对细胞的培养环境做出对比。如果两组细胞的生长速度和细胞状态无明显变化，客户可继续培养扩增，如果两组细胞在生长速度和细胞状态上有微妙或明显的变化，那么我们建议客户需要更换更好的血清培养细胞。