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实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

PCR技术的定量原理：
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扩增曲线
在Real-time qPCR中，对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号，随着反应的进行，监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线，即为扩增曲线。荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。
在Real-time qPCR扩增早期，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化，此时即为基线期。
PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数形式增加的，随着反应循环数的增加，最终PCR反应不再以指数形式生成模板，从而进入“平台期”。在该时期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR的终产物量与起始模板量之间无线性关系，所以根据最终的PCR产物量不能计算出初始模板量。
服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR检测试剂盒：
(一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4ºC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4ºC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4ºC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20ºC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
Colletotrichum indicum Dastur, anamorph名称: 人肝癌；Hep3B2.1-7 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Desulfosporosinus orientis (Campbell and Po ..名称: 人脐静脉融合；EA.hy926 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名称: 人肝母瘤；HuH-6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Staphylococcus aureus subsp.aureus Rosen ..名称: 人非小肺癌；HCC827 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Blastomyces dermatitidis Gilchrist et Stokes名称: 小鼠颅盖成纤维；OP9 α－MEM：AlphaMinimumEssentialMedium(withNucleosides)10%FBS

Podoxyphium indicum Sharma et al.名称: 人胃癌；NCI-N87[N87] RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Candida boidinii Ramirez, anamorph名称: 人胃腺癌；AGS RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Polysphondylium asymetricum Vadell et Caven ..名称: 人肺腺癌；NCI-H1395 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Achlya bisexualis Coker名称: 人喉癌；LCC RPMI1640(w/oHepes)15%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名称: 人胃癌；MKN-28 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Chaetomium trilaterale Chivers var.trilat ..名称: 人内膜低分化腺癌；EAG3 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS

Candida albicans (Robin) Berkhout名称: 人结直肠腺癌长春新耐药株；HCT-8/V RPMI1640(w/oHepes)10%FBS+2000ng/ml长春新

Klebsiella pneumoniae名称: 小鼠肺成纤维样；C57/B6-L DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Homo sapiens, human名称: 小鼠皮肤成纤维样；C57/B6-S DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名称: 人内膜异位症患者在位内膜间质永生化；hEM15A DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)15%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名称: SV40转染人成骨；hFOB1.19 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS+300ng/mlG418
广州管圆线虫核酸检测试剂盒人轮状病(RV)IgMELISA试剂盒sICAM-1ELISAKit产品规格:48T/96T。

人腺病IgG(ADV-IgG)ELISA试剂盒sICAM-1ELISAKit产品规格:48T/96T。

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人流感病抗体IgG(FLU)ELISA试剂盒sICAM-1ELISAKit产品规格:48T/96T。

人登革热抗体(DF-Ab)ELISA试剂盒sICAM-1ELISAKit产品规格:48T/96T。

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