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寨卡病毒和登革病毒核酸检测试剂盒

参  考  价面议
具体成交价以合同协议为准

产品型号50T

品       牌其他品牌

厂商性质经销商

所  在  地上海市

更新时间:2021-05-08 10:58:36浏览次数:90次

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寨卡病毒和登革病毒核酸检测试剂盒保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

参数规格:
产品名称:寨卡病毒和登革病毒核酸检测试剂盒
产品规格:50T
产品货号:FS-P10007
产品分类:荧光PCR法
产品运输:低温运输
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
产品特点:
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤 
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性*定量方法,已得到的*,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,最终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
Saturnispora saitoi (Kodama et al.) Liu et ..名称: 小鼠脾脏成纤维样;C57/B6-SPL DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名称: 幼兔肾上皮样 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Ewingella americana Grimont et al.名称: 幼兔肺成纤维样 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Agaricus bisporus (Lange) Imbach, teleomorph名称: 幼兔骨髓间充质干 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Bipolaris chloridis (Alcorn) Alcorn, anamor ..名称: 非洲绿猴胚胎肾;marc145 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%FBS

Acremonium sp.名称: 人肝癌;HepG2 10%FBS

Micromonospora pallida (Luedemann and Brods ..名称: 人肾透明腺癌;786-O[786-0] RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

Candida blankii Buckley et van Uden, anamor ..名称: 人神经母瘤;SH-SY5Y DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..名称: 人癌;MDA-MB-231 10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名称: 人肝癌;Huh-7 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名称: 人B淋巴白血病;BALL-1 RPMI1640(含2mML-glutamine)(w/oHepes)10%FBS

freeze-dried名称: 人膀胱移行癌;T-24 RPMI1640(含2mML-glutamine)(w/oHepes)10%FBS

Sirococcus strobilinus Preuss名称: 黑腹果蝇胚胎;D.Mel 10%FBS

Homo sapiens, human名称: 人结肠癌;CaCo-2 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%FBS

dried名称: 中国地鼠卵巢-木糖基转移酶I缺陷型;pgsA-745 F12K10%FBS

Wickerhamomyces anomalus (Hansen) Kurtzman ..名称: 草地夜蛾卵巢;Sf9 10%FBS
寨卡病毒和登革病毒核酸检测试剂盒EB病IgM(EBvIgM)ELISA试剂盒sIgAELISAKit产品规格:48T/96T。

人腮腺炎病IgGELISA试剂盒sIgAELISAKit产品规格:48T/96T。

人腮腺炎病IgMELISA试剂盒SIgAELISAKit产品规格:48T/96T。

人军团菌抗体IgG(LPAb-IgG)ELISA试剂盒SIgAELISAKit产品规格:48T/96T。

人军团菌抗体IgM(LPAb-IgM)ELISA试剂盒signaltransduction-Smad1ELISAKit产品规格:48T/96T。

人军团菌抗体IgA(LPAb-IgA)ELISA试剂盒SJAELISAKit产品规格:48T/96T。

人水痘带状疱疹病IgG(VZV-IgG)ELISA试剂盒SKELISAKit产品规格:48T/96T。

人水痘带状疱疹病IgM(VZV-IgM)ELISA试剂盒SLAELISAKit产品规格:48T/96T。
PCR的反应条件:
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小,设定25~30个循环。
如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45~68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外,由于在60~68℃间,也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时,每kbp大体可设定30秒~1分钟;当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常,Anneal温度太高,有时会得不到扩增产物;Anneal温度太低时,容易发生非特异性反应。另外,Extension时间太短时,会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成;而Extension时间太长时,会出现Smear。

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