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货号 | FS-X9534 |
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产品属性:
产品名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 |
Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit | 20次|50次 | FS-X9534 |
产品介绍:
本试剂盒是用EGFP标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨suan的一种细胞凋亡检测试剂盒。一个包装的本试剂盒共可以检测20个样品。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。 试剂盒组份: Annexin V-EGFP—————————100μl Annexin V-EGFP结合液——————12ml 碘化丙啶染色液—————————220μl Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白,参与细胞内的信号转导。但仅Annexin V被报道可以调控一些PKC的活性。 Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨suan(phosphatidylserine,简称PS)。磷酯酰丝氨suan主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨suan外翻到细胞表面,即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨suan暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨suan结合后可以阻断磷酯酰丝氨suan的促凝血和促炎症反应活性。 用带有绿色荧光的荧光探针EGFP标记的Annexin V,即Annexin V-EGFP,就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨suan的外翻这一细胞凋亡的重要特征。 本试剂盒还提供了碘化丙啶染色液,碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞,呈现红色荧光。对于坏死细胞,由于细胞膜的完整性已经丧失,Annexin V-EGFP可以进入到细胞浆内,与位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨suan结合,从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。 综上所述,用Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色后,正常的活细胞不被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色;凋亡早期的细胞仅被Annexin V-EGFP染色,碘化丙啶染色呈阴性;坏死细胞和凋亡晚期的细胞可以同时被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色。 储存条件:4℃避光,有效期6个月。 |
注意事项:
1、本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
3、禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并*清除残留清洁剂。
6、避免皮肤或粘膜与试剂接触。
7、需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融,否则将会增加空白吸收,从而影响检测结果。最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。
8、用培养基或 PBS 来配制待检测药物。如果待测药物有还原性,则测定不含细胞,仅含有 MTS 的待测药物溶液在 490 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小,则可以直接加入 MTS ,如果吸光度相对较大,则需要除去培养基,并用新鲜培养基洗涤细胞两次,然后加入新的 100 μl 培养基和 10 μl MTS 进行检测。
9、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
10、加 MTS 溶液后孵育时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,对于大多数情况孵育 1 小时即可,白细胞需要培养较长时间。
11、如果不是使用 96 孔板检测,MTS 溶液的用量相应等比例增加即可。
核糖核suan外切mei3(ERI3)检测试剂盒 forExoribonuclease3(ERI3)
高尔基体蛋白A4(GOLGA4)检测试剂盒 forGolginA4(GOLGA4)
无翅型MMTV整合位点家族成员3A(WNT3A)检测试剂盒 forWinglessTypeMMTVIntegrationSiteFamily,Member3A(WNT3A)
防御suβ121(DEFβ121)检测试剂盒 forDefensinBeta121(DEFb121)
氨jia基转移mei(AMT)检测试剂盒 forAminomethyltransferase(AMT)
CD320分子(CD320)检测试剂盒 forClusterOfDifferentiation320(CD320)
着丝粒蛋白F(CENPF)检测试剂盒 forCentromereProteinF(CENPF)
Ⅲ型胶原(COL3)检测试剂盒 forCollagenTypeIII(COL3)
多肽-N-乙酰氨基半乳糖转移mei1(GALNT1)检测试剂盒 forPolypeptide-N-Acetylgalactosaminyltransferase1(GALNT1)
分泌型磷蛋白2(SPP2)检测试剂盒 forSecretedPhosphoprotein2(SPP2)
meiⅡ(CA2)检测试剂盒 forCarbonicAnhydraseII(CA2)
脑钠su(BNP)检测试剂盒 forBrainNatriureticPeptide(BNP)
半胱氨suan蛋白mei抑制剂5(CST5)检测试剂盒 forCystatin5(CST5)
抗Ⅱ型胶原蛋白抗体(Anti-CⅡAb)检测试剂盒 forAnti-TypeIICollagenAntibody(Anti-CIIAb)
干扰suα(IFNα)检测试剂盒 forInterferonAlpha(IFNa)
端锚聚合mei1(TNKS1)检测试剂盒 forTankyrase1(TNKS1)
溶血脂酰基转移mei1(LPCAT1)检测试剂盒 forLysophosphatidylcholineAcyltransferase1(LPCAT1)
Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒硬脂suan聚乙二chun50标准品 规格:200mg 英文名称:Polyoxyl 50 Stearate
硬脂suan聚乙二chun40标准品 规格:200mg 英文名称:Polyoxyl 40 Stearate
油suan聚烃氧酯标准品 规格:500mg 英文名称:Polyoxyl Oleate
jia基纤维su标准品 规格:1g 英文名称:Methylcellulose (AS)
羟丙基jia基纤维su标准品 规格:250mg 英文名称:
羟丙基纤维su标准品 规格:500mg 英文名称:Hydroxypropyl Cellulose
乙基纤维su标准品 规格:1g 英文名称:Ethylcellulose
葡聚糖1标准品 规格:50mg 英文名称:Dextran 1
葡聚糖T-10标准品 规格:200mg 英文名称:Dextran T-10
葡聚糖40标准品 规格:50mg 英文名称:Dextran 40
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除细胞消化液。加入含血清的*细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除细胞消化液后,加入含血清的*培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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