纤维环细胞 返回列表页

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

产品属于：

产品名称：纤维环细胞    

产品规格：5×105

货号：FS-01X9859

产品类型：原代细胞

单位：T25/瓶

提供细胞鉴定：提供免疫荧光鉴定报告

保存培养温度（℃）：37

运输温度（℃）：常温

细胞培养的优点：

注意事项：

大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒 英文名称：Rat Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒 英文名称：Rat Transforming Growth factor β1,TGF-β1 ELISA Kit 规格:96T/48T

大鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)ELISA试剂盒英文名称：Rat Stem cell factor/mast cell growth factor,SCF/MGF ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠烟酰腺二核磷(NADPH)ELISA试剂盒英文名称：Rat nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA试剂盒英文名称：Rat Platelet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)ELISA试剂盒英文名称：Rat Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α,PDGFsR-α ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠神经营养因子4(NT-4)ELISA试剂盒英文名称：Rat Neurotrophin 4,NT-4 ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒英文名称：Rat Neurotrophin 3,NT-3 ELISA Kit 规格:96T/48T

大鼠神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒英文名称：Rat Nerve growth factor,NGF ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA试剂盒英文名称：Rat macrophage inflammatory protein 3α,MIP-3α ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠层连蛋白/板层(LN)ELISA试剂盒英文名称：Rat Laminin,LN ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠白介6(IL-6)ELISA试剂盒 英文名称：Rat Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠白介4(IL-4)ELISA试剂盒英文名称：Rat Interleukin 4,IL-4 ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠白介2(IL-2)ELISA试剂盒 英文名称：Rat Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠白介1α(IL-1α)ELISA试剂盒 英文名称：Rat Interleukin 1α ,IL-1α ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠白介18(IL-18)ELISA试剂盒英文名称：Rat Interleukin 18,IL-18 ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠白介10(IL-10)ELISA试剂盒 英文名称：Rat Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit规格:96T/48T

大鼠胰岛样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒英文名称：Rat Insulin-like growth factor 2,IGF-2 ELISA Kit规格:96T/48T
纤维环细胞phospho-PRKAB1(Ser182)  磷化腺单磷活化蛋白激β1抗体规格: 0.1ml

AMPK gamma 1  腺活化蛋白激γ1抗体规格: 0.2ml

KLHDC5  kelch样蛋白5抗体规格: 0.2ml

phospho-C-Myc(Thr358)  磷化致癌基因C-Myc抗体规格: 0.1ml

phospho-C-Myc(Thr373)  磷化致癌基因C-Myc抗体规格: 0.1ml

KLHL22  Kelch样蛋白22抗体规格: 0.2ml

KNTC1/Kinetochore  着丝点关联蛋白1抗体规格: 0.2ml

AMPK gamma 3/PRKAG3  腺活化蛋白激γ3抗体规格: 0.2ml
实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。