BRD4抑制剂(ARV-825)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10517

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：BRD4抑制剂(ARV-825)

英文名称：ARV-825

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

货号：FS-X10517

产品介绍:

英文名称：ARV-825

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

ARV-825是一种PROTAC类的BRD4抑制剂。ARV-825对BRD4的BD1和BD2结构域具有高亲和力，Kds值分别为90和28nM。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

号：1818885-28-7

纯度：99.35%

分子式：C??H??ClN?O?S

分子量：923.43

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

茶树菇转录因子Tbx3抗体Anti-IFNG Antibody透明质合3(HAS3)

斑玉蕈tinagl1抗体Anti-IFNG Antibody透明质合2(HAS2)

三线镰刀菌辣椒受体5抗体Anti-IFNG Antibody透明质合1(HAS1)

糊精乳杆菌肿瘤排斥抗原gp96 1 变异体抗体Anti-IFNG Antibody透明质基葡糖4(HYAL4)

野生金针菇(白色)组织因子途径抑制剂抗体Anti-IFNG/IFN-γ Antibody透明质基葡糖3(HYAL3)

中华根瘤菌星形瘤高表达蛋白抗体（环指蛋白100）Anti-IFNGR1 Antibody透明质基葡糖2(HYAL2)

根瘤菌微管蛋白β5抗体Anti-IFT88 Antibody透明质基葡糖1(HYAL1)

黑曲霉转录中介因子Tif1α抗体Anti-IFNGR2 Antibody头蛋白(NOG)

大肠埃希菌转录中介因子Tif1β抗体Anti-IFNGR1 Antibody戊二脱氢(OGDH)

威林格氏线黑粉菌磷化转录中介因子Tif1β抗体Anti-IGF1 Antibody戊二受体1(OXGR1)

酿酒酵母非受体酪蛋白激2抗体Anti-IGF1R Antibody铜转运蛋白2(COPT2)

串珠镰刀菌*转录中介因子Tif1γ抗体Anti-IGF1R Antibody铜转运蛋白1(COPT1)

毛壳调节染色体组装激1抗体Anti-IGF1 Antibody铜离子转运ATPβ肽(ATP7β)

茎点霉属翻译控制肿瘤蛋白抗体Anti-IGF2(IGF-2) Antibody铜蓝蛋白(CP)

渐绿木霉肿瘤/抗原20抗体Anti-IGF2-AS Antibody铜伴侣超氧化物歧化(SOD4)

棒状杆菌属线粒体内膜转位抗体Anti-IGF2R Antibody同种异体移植炎症因子1(AIF1)

5-羟色胺受体5A抗体猪霍乱沙门氏菌小鼠小肠平滑肌细胞

5-羟色胺受体7抗体立枯丝核菌（斜面）小鼠结肠平滑肌细胞

5-羟色胺受体6抗体分枝杆菌属小鼠食管上皮细胞

ATP依赖解旋SMARCA2抗体动物双歧杆菌乳亚种小鼠小肠粘膜上皮细胞
BRD4抑制剂(ARV-825)大肠埃希 Fmoc-D-4-苯钩端螺旋体IgM抗体

Acinetobacter bereziniae Nemec et al. (S,S)-DACH-萘基 Trost 配体柯萨奇病A16IgG抗体

黑木耳硫化钙胰岛原

酿酒酵母 2-溴-5-(三氟甲氧基)糖化血红蛋白A1c

近绿曲霉双(二苯基膦苯基)二化钯(II)糖化蛋白

青色链霉乙酰丁酯血糖

香菇 2-异丁脊髓灰质炎病IgG抗体

耐冷冷杆苏丹橙G肌钙蛋白I

扣囊复膜孢酵母正已酐补体蛋白5

淡紫拟青霉十氢喹啉（顺式+反式）2,5寡腺合成

牛奶类芽胞杆十联苯2,5寡腺合成1

蓝色小单孢 3-氨基-4-吡啶1,25-二羟基维生D3

灰树花 2,2-二羟基偶氮苯角蛋白18

侧耳木霉二异基磷化氢α平滑肌肌动蛋白

梨形毛霉 Fmoc-Lys(Ddiv)-OH甲状腺结合球蛋白β
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)