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货号 | FS-X10830 |
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产品介绍:
Crizotinib hydrochloride是一种有效的c-Met/ALK抑制剂,细胞实验中IC50分别为11nM,24nM 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! 号:1415560-69-8 别名:PF-02341066 hydrochloride 纯度:99.86% 分子量:486.8 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
中文名称:c-Met/ALK抑制剂
英文名称:Crizotinib hydrochloride
产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
货号:FS-X10830
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
立枯丝核菌大鼠B淋巴瘤因子2Anti-OXR1 Antibody人β内酰(β-lactamase)
污黑腐皮壳大鼠CXC趋化因子受体3Anti-ORC1 Antibody人β内酰(β-lactamase)
棘孢小单孢菌小鼠肿瘤坏死因子βAnti-OSR2 Antibody人β甘露糖(β Manase)
Arenibacter sp.人食欲/阿立新BAnti-OVOL1 Antibody人β甘露糖(β Manase)
灰平链霉菌小鼠Ⅳ型胶原Anti-P2RY11 Antibody人β半乳糖(βGAL)
孢囊放线菌大鼠中性粒弹性蛋白Anti-P2RY13 Antibody人β半乳糖(βGAL)
立枯丝核菌人促睡眠肽Anti-P2RY4 Antibody人αL艾杜糖(IDUA)
PET-22b人6-羟多巴Anti-P2RY14 Antibody人αL艾杜糖(IDUA)
依利诺斯类芽胞杆菌小鼠己糖激Anti-P2RY8 Antibody人αL艾杜糖(IDUA)
枯草芽孢杆菌大鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子Anti-P4HB Antibody人αL艾杜糖(IDUA)
宇佐美曲霉小鼠脱氢E1Anti-p90 RSK1 Antibody人α2抗纤溶(α2-AP)
新型隐球酵母原变种大鼠羟脯Anti-PACRG Antibody人α2抗纤溶(α2-AP)
金黄杆菌属人心纳Anti-PABPC5 Antibody人N-乙酰-β-D-基葡萄糖(NAG)
榛色假单胞菌小鼠糖原合成激Anti-PABPC3 Antibody人N-乙酰-β-D-基葡萄糖(NAG)
地衣芽胞杆菌大鼠骨保护配体Anti-PACS1 Antibody人L解(PAL)
小孢根霉华变种人神经髓鞘蛋白Anti-PAK2 Antibody人L解(PAL)
RAS家族关联结构域蛋白6抗体#牛肝菌属人小气道上皮细胞
Ras样蛋白A抗体杨褐盘二孢多芽管转化型人脐静脉内皮细胞*培养基:(原代细胞)
Rh血型C抗原抗体松色二孢鼠神经母细胞瘤细胞
环指蛋白11抗体盘多毛孢菌小鼠辅助性T细胞
c-Met/ALK抑制剂胶孢 肉汤培养基Dβ干扰
塞氏柠檬杆 增肉汤培养基E瘟病抗体
金色毛壳 琼脂培养基F低密度脂蛋白
青霉 肉汤培养基G胰岛
稻生黄单胞 琼脂培养基H甲型肝炎1型病
大丽花轮枝孢(棉花黄萎病) 乳糖-双岐杆鉴定浆膜炎抗体
饮料 胭脂红、柠檬黄、日落黄 松三糖-双岐杆鉴定禽呼肠孤病抗体
酿酒酵母 棉子糖-双岐杆鉴定新城疫中强核
佛罗里达红曲霉 山梨-双岐杆鉴定白介4
产气肠杆 N,N-二乙基-2-甲基-1,4-苯白介
浸麻类芽孢杆 2-氨基-5-吡啶Ⅱ型胶原
Pseudomonas defluvii 双(4-溴苯基)分泌型球蛋白A
醋醅类芽孢杆 叔戊基苯含黄单氧化3
新月弯孢 3-乙酰基苯γ谷-半胱合成
锈赤蜡黄链霉 (s)-(+)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯乙酰肌肽
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