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货号 | FS-X9600 |
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产品介绍:
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。精确的检测细胞增殖方法是BrdU法。EdU法检测试剂盒是brdu方法的革命性突破。EdU(5-溴-2-脱氧嘧啶)试剂盒是一种嘧啶类似物,可以在DNA合成期整合入DNA双链。EdU法检测是基于“点击"反应,一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃的原子共价反应。 本试剂盒中,EdU试剂含有炔烃,而kFlour647染料试剂含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有效,易于使用。只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的EdU。标准化的固定和去污剂促渗可以使检测试剂进入细胞,而brdu方法则需要DNA变性(如酸变性、热变性或者用Dnase消化)去暴露BrdU,从而方便BrdU抗体结合。 |
中文名称:kFluor647-EdU法细胞增殖检测试剂盒(流式)
英文名称:
产品规格:20T|10T|50T
货号:FS-X9600
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
原钙黏suβ5(PCDHβ5)检测试剂盒 forProtocadherinBeta5(PCDHb5)
鞘氨chun-1-磷suan磷suanmei1(SGPP1)检测试剂盒 forSphingosine-1-PhosphatePhosphatase1(SGPP1)
调节激活正常T-细胞表达分泌因子(RANTES)检测试剂盒 forRegulatedOnActivationInNormalT-CellExpressedAndSecreted(RANTES)
主要性蛋白(MBP)检测试剂盒 forMajorBasicProtein(MBP)
V-Yes-1Yamaguchi肉瘤病毒相关癌基因同源物(LYN)检测试剂盒 forV-Yes-1YamaguchiSarcomaViralRelatedOncogeneHomolog(LYN)
肉毒-O-jia基转移mei(CORT)检测试剂盒 forCarnitine-O-Octanoyltransferase(CORT)
烟型受体α3(CHRNα3)检测试剂盒 forCholinergicReceptor,Nicotinic,Alpha3(CHRNa3)
巨噬细胞幼红细胞黏附蛋白(MAEA)检测试剂盒 forMacrophageErythroblastAttacher(MAEA)
shi神经缩蛋白3(OPA3)检测试剂盒 forOpticAtrophy3(OPA3)
类胰蛋白mei(TPS)检测试剂盒 forTryptase(TPS)
载脂蛋白E(APOE)检测试剂盒 forApolipoproteinE(APOE)
凋亡相关因子配体(FASL)检测试剂盒 forFactorRelatedApoptosisLigand(FASL)
脂肪meiM(LIPM)检测试剂盒 forLipaseM(LIPM)
HtrA丝氨suan肽mei4(HTRA4)检测试剂盒 forHtrASerinePeptidase4(HTRA4)
Kindlin3蛋白(KIND3)检测试剂盒 forKindlin3(KIND3)
激肽释放mei6(KLK6)检测试剂盒 forKallikrein6(KLK6)
去jia(NE)检测试剂盒 forNoradrenaline(NE)
kFluor647-EdU法细胞增殖检测试剂盒(流式)甜菊双糖甙A标准品 规格:300mg 英文名称:Rebaudioside A
拉定标准品 规格:200mg 英文名称:Cephradine
碳suan钾标准品 规格:1g 英文名称:Potassium Carbonate (AS)
标准品 规格:200mg 英文名称:Perphenazine
盐suan异丙嗪标准品 规格:500mg 英文名称:Promethazine Hydrochloride
嘧达莫标准品 规格:200mg 英文名称:Dipyridamole
盐suan去jia咪嗪标准品 规格:125mg 英文名称:Desipramine Hydrochloride
维生suK3标准品 规格:200mg 英文名称:Menadione (Vitamin K3)
lv氮草标准品 规格:200mg 英文名称:Chlordiazepoxide CIV
benjiasuan钾标准品 规格:1g 英文名称:Potassium Benzoate (AS)
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