ROCK抑制剂(Thiazovivin)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10853

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：ROCK抑制剂(Thiazovivin)

英文名称：Thiazovivin

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

货号：FS-X10853

产品介绍:

Thiazovivin(Tzv)是新型的ROCK抑制剂，IC50为0.5μM，能促进hESC的存活。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

号：1226056-71-8

纯度：99.32%

分子量：311.36

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

酿酒酵母小鼠干扰诱导蛋白Anti-POTEA Antibody人C反应蛋白(CRP)

浅玫瑰链霉菌大鼠分泌型免疫球蛋白AAnti-POTEB Antibody人C反应蛋白(CRP)

干草鞘单胞菌人胃癌标志物Anti-POTEG Antibody人固(ALD)

金黑小单孢菌小鼠上皮中性粒活化肽78Anti-POU2F1 Antibody人固(ALD)

大鼠血红氧合2Anti-POTEH Antibody人肌红蛋白(MYO/MB)

曲霉小鼠氧化低密度脂蛋白抗体Anti-PPARD Antibody人肌红蛋白(MYO/MB)

*红城红球菌人鳞状上皮癌抗原2Anti-PPARA Antibody人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)

产二链霉菌大鼠骨胶原交联Anti-PPFIBP1 Antibody人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)

链格孢苹果专化型小鼠抗平滑肌抗体Anti-PPHLN1 Antibody人血管生成受体/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪激1(Tie1)

玉大斑病菌大鼠Ⅰ型前胶原C末端肽Anti-PPHLN1 Antibody人血管生成受体/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪激1(Tie1)

尖孢镰孢人胰腺癌标志物CA242Anti-PPIF Antibody人血管生成2(ANG-2)

人胃肠癌标志物CA199Anti-PPM1K Antibody人血管生成2(ANG-2)

黑曲霉小鼠胚胎干系MESPU30Anti-PPM1L Antibody人血管生成1(ANG-1)

白僵菌大鼠脱氧吡啶/脱氧吡啶啉Anti-PPM1L Antibody人血管生成1(ANG-1)

拟柱形德克斯酵母大鼠吡啶交联物Anti-PPM1K Antibody人血管生长(ANG)

死海盐盒菌小鼠核因子κB亚基p65亲和肽Anti-PPP1R11 Antibody人血管生长(ANG)

转录因子DP3抗体相关抗原661色二孢人结肠癌氟耐药株

早期未分化视网膜及晶状体蛋白EURL抗体长根小奥德蘑鳞柄变种人结肠癌耐氟细胞株

睾丸特异激底物蛋白抗体粗柄侧耳(俗名：北风菌)鼠多巴胺能神经元细胞

MED17抗体青霉卵巢透明细胞癌
ROCK抑制剂(Thiazovivin)海水球艾格琼脂瘟病IgA抗体

孢篮状 TM培养基瘟病IgG抗体

白黄阮继生氏 DL-泛瘟病IgM抗体

弯孢 2-环己酮甲乙酯瘟抗体

异常威克汉姆酵母假单胞分离肉汤间粘附分子1

糙卷霉肌测定培养基纤连蛋白

类食品乳杆性肉汤性结合球蛋白

鲁毛霉烟测定培养基雄烯二酮

浅黄曲霉维生B12测定用培养基雄烯酮

香菇测定培养基血管紧张1-7

豇豆慢生根瘤泛测定培养基血管紧张ІІ

薛瓦酵母游离生物测定培养基血管内皮生长因子

大肠埃希 2-血管内皮粘附分子1

卵孢木霉二环己基化膦血管生成1

红缘层孔气单胞培养基基础血管生成2
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)