HGC-27-LUC人胃癌细胞-荧光素酶标记-生化仪器-上海琛艺实业有限公司

测量范围	其他	产地	国产
工作电压	HepG2-LUC细胞V	加工定制	是
类型	其他	适用领域	化工
输入信号电压	HGC-27-LUCV

上海琛艺实业有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程公司。公司新引进细胞上千株，其中人的已通过STR鉴定的有几百株，欢迎各位选购。。。。。。

细胞名称：HGC-27-LUC人胃癌细胞-荧光素酶标记

培养条件：DMEM +10% FBS

形态：贴壁；上皮细胞样

“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力时期，称指数增生期(对数生*)，适宜进行各种试验。

formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。

目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由冰晶形成的细胞损伤。
1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌种保存很少用于细胞冻存。
2、取对数生*的细胞，用*把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中。
3、离心1000 rpm,5 min。
4、去除*及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的zui终密度为5x10^6/ml~1x10^7/ml。
5、在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者。
6、冻存：标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min；当温度达到-25℃以下时，可增至-5℃~-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。

1.接种：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个接种到96孔板，每孔体积200ul.

2细胞培养：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。

3.呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.

继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。

HGC-27-LUC人胃癌细胞-荧光素酶标记

组成：

组份	数目
细胞	1 T-25瓶
细胞说明书	一份

细胞简介：

生长特性：	贴壁生长
细胞来源：	从ATCC/中科院/协和医院等地引进
培养条件：	培养基：F12K+0.1mg/ml肝素+1%ECGS +10%FBS（*德国SERANA S-FBS-SA-015优等胎牛血清）气相：空气95%，二氧化碳5% 温度：37℃
培养：	贴壁细胞 1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培育，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代； 2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，次传代比例为1:2。 3传代步骤：将0.25%含EDTA置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入1mlPBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1ml预热好的，置于37°孵育消化（次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为消化时间，记录消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1ml培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入培养基重悬细胞，进行传代。二、悬浮细胞 1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，然后置于无菌操作台，打开瓶口，轻轻吹打后，将其中的细胞悬液转移到离心管中，然后1200rpm离心3min，去上清； 2.将离心好的细胞转移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鲜培养基，然后将其置于细胞培养箱中培育，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液（离心后去旧液，加入新鲜培养基）； 3.显微镜观察细胞数目比较多时，对其进行传代，次传代比例为1:2（离心后平均分成两瓶培养）。
细胞总数：	1~3*10⁶
传代周期：	2-3天
传代比例：	1:2~1:4
换液频率：	2-3天
冻存液：	90%FBS+10%DMSO

　　三、如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心5分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
　　注意：换液时一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。

更多细胞培养注意事项如下

1培养细胞时应使用5%还是10%CO2，或者根本没有影响？
    答：一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5%CO2培养细胞。
11.细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？
    答：除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞)，在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养方瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
12.冷冻管应如何解冻？
    答：取出冷冻管后，须立即放入37℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1－2 分钟内大部分融化，特别注意，需残留一小块冰块，就可拿到超净工作台操作细胞，用75％消毒冻存管，用新鲜培养基将细胞转移至培养瓶。另外冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂

13.如何用台盼兰计数活细胞？

    答：将样品适当稀释后，用稀释后的样品和0.4％的台盼兰溶液按1:1混合后，用移液枪点样到血球计数板，置于倒置显微镜下观察、计数，其中蓝色细胞是死细胞，因活细胞排斥台盼兰，不被染色。
14.细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？
    答：冷冻管内细胞数目一般为1-8×106 cells/ml vial。
15.细胞冷冻培养基之成份为何？
    答：动物细胞冷冻保存时较常使用的冷冻培养基是含9 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO 直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。