上海锐聪实验设备有限公司
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阅读：291发布时间：2010-08-30
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用 途：
ABA ELISA试剂盒用于植物提取液ABA 。本试剂盒可以检测天然和重组的ABA 。
本试剂盒于科研、而非用于临床诊断。
试验原理：
ABA 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知ABA 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将ABA 和*标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中ABA 的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
| 试剂盒成份（2-8℃保存） | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
| 96/48人份酶标板 | 1块板（96T） | 半块板（48T） | 即用型 |
| 塑料膜板盖 | 1块 | 半块 | 即用型 |
| 标准品：40nmol/L | 1瓶（0.6ml） | 1瓶（0.3ml） | 按说明书进行稀稀 |
| 空白对照 | 1瓶（1.0ml） | 1瓶（0.5ml） | 即用型 |
| 标准品稀释缓冲液 | 1瓶（5ml） | 1瓶（2.5ml） | 即用型 |
| *标记的抗ABA抗体 | 1瓶（6ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 亲和链酶素-HRP | 1瓶（10ml） | 1瓶（5.0ml） | 即用型 |
| 洗涤缓冲液 | 1瓶（60ml） | 1瓶（30ml） | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 底物B | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 终止液 | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
自备材料
1． 蒸馏水。
2． 加样器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
3． 振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1． 此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性，但没有实验室可*保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病，依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。
2． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
3． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
4． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
试剂的准备
1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
| 40 nmol/L | （6号标准品） | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。 |
| 20 nmol/L | （5号标准品） | 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 10 nmol/L | （4号标准品） | 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 5.0 nmol/L | （3号标准品） | 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 2.5 nmol/L | （2号标准品） | 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 1.25 nmol/L | （1号标准品） | 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 0 nmol/L | （空白对照） | 原始浓度不用稀释直接加入50ul。 |
2． 洗涤缓冲液（20×）的稀释：蒸馏水20倍稀释。
操作步骤
1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5． 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育15分钟。避免光照。
8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。
建议使用的实验方案
| | 标准品浓度（nmol/L） | | ||||||||||
| A | 40 | 40 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| B | 20 | 20 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| C | 10 | 10 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| D | 5.0 | 5.0 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| E | 2.5 | 2.5 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| F | 1.25 | 1.25 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| G | 0 | 0 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
| H | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 | 样品 |
结果分析
以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的ABA 标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的ABA 含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。
试剂盒性能
1． 灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2． 特异性：不与人其它细胞因子反应。
3． 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
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