创建轻链改组噬菌体文库

[方法]
1．配制50ul PCR反应混合液， 包含：
● 水，34．5ul
● 20XdNTP（每种5mmol／L）， 2，5ul
● 10XVent聚合酶缓冲液，5．0ul
● LMB3引物（10pmol/u1），2．5ul
● scF讨HXhoFOR引物（10pmol/ul），2．5ul
● scFv模板DNA（100ng）， 2．0u1
● VentDNA聚合酶（2单位），1．0u1
2．在有加热盖的热循环仪内加热反应混合液到94℃，5分钟。
3．以94℃30秒、42℃30秒、72℃1分钟的条件共循环25次，扩增VH基因。
4．用Wizard PCR纯化试剂盒芝之PCR产物。
5．用XhoI和NcoI消化PCR产物；但除了用XhoI替代 NcoI，还需在NEB2缓冲液中进行消化。
6．制备VL基因文库载体；但需用XhoI和NcoI消化载体.
7．连接已消化的PCR产物和已消化的载体，并电转化到大肠杆菌TG1中,构建轻链改组文库。