从微量样本中同时提取mRNA和天然蛋白

有时，细胞就是那么少，但又要开展多项分析，着实让人为难。丹麦哥本哈根大学的研究人员开发出一种新方法，能从微量的样本中同时提取mRNA和天然蛋白。这项成果发表在《BioTechniques》5月刊上。
在生物学研究的许多领域，样本量往往很有限，特别是人体细胞和组织，如卵泡和胚胎干细胞。但是，研究人员经常需要开展多项分析，比如基因表达和蛋白分析。这就需要从同一个样本中分离出RNA和蛋白质。不过，样本本来就很少，分成两份来操作更是不可能。
目前已有一些操作方案，能从少量样本中同时提取出DNA、RNA和蛋白质。然而，大部分方法都需要将蛋白质变性，以保护RNA不受降解，这就使得一些需要天然蛋白的分析无法开展，比如酶活分析、非变性PAGE或免疫共沉淀。
一种新方法，能从含有少量细胞的样本中同时纯化mRNA和天然蛋白。这种方法改良自现有的变性磁珠oligo-dT方案，在天然状态下分离mRNA和蛋白质，同时在4°C且还原剂存在时开展RNA分离，以减少RNA的降解。
他们采用Dynabeads® Oligo (dT)25磁珠来选择性分离mRNA，同时以非离子型去污剂来取代离子型去污剂，以便更好地保护蛋白质的天然状态。因此，裂解液中仍含有活性的RNase，但通过将mRNA与磁珠杂交时的温度降至4°C，可有效抑制RNase的活性，同时他们延长了杂交时间。
研究人员在新生大鼠卵巢、人卵巢颗粒细胞（hGC）和人黄体（CL）上检验了这种新方法。他们测定了抑制素α亚基（Inha）和两个看家基因（Rpl32和Gapdh）的mRNA表达，并测定了磷酸二脂酶（PDE）、caspase-3和乳酸脱氢酶（LDH）的酶活以及GAPDH和β-actin的免疫沉淀。
结果表明，这种方法在分离RNA的数量和质量上与现有的试剂盒相当，同时保留了有功能的蛋白质。他们也检验了标准oligo-dT方案下的RNA产量，发现Inha 、Rpl32和Gapdh基因所获得的Cq值没有差异。此外，酶活检测也发现蛋白质未受RNA纯化的影响。
这种方法能从含有少量细胞的样本中同时纯化mRNA和天然蛋白。当起始材料很少，或需要研究mRNA与蛋白活性的关联时，这特别有用。