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ELISA试剂盒系统中固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子发生变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q 可以将二者连接起来，从而造成检测OD值偏高。
嗜异性抗体；人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）Ig (s) 结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA试剂盒系统中一抗和二抗连接起来，也能造成检测OD值偏高。
此外血清中嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质及血清中脂质过高、*、血红蛋白及血液粘度过大等，均对ELISA试剂盒测定结果有干扰作用。
由于各种人为原因引起的标本溶血，均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为标记的 ELISA试剂盒测定中，会导致非特异性显色，干扰测定结果。
标本受细菌污染 ：因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。
标本保存不当 ：在冰箱中保存过久的标本，血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体，在间接法ELISA试剂盒测定中会导致本底过深、甚至造成检测OD值偏高；
标本凝集不全；在ELISA试剂盒检测中影响血清血浆样本的因素很多，在考虑试剂因素和操作因素之外，也应从标本因素方面进行分析。
常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。
类风湿因子 ：血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）在ELISA检测中，可与ELISA试剂盒系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致检测OD值偏高。
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