沪鼎生物分享胎牛血清使用中的常见问题及解决方案

沪鼎生物分享胎牛血清使用中的常见问题及解决方案

一、如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损？
   胎牛血清因为其产品的特性，在储存的时候需要多加注意，错误的操作会使胎牛血清失去活性，在实际应用的时候应注意以下几点：

   在解冻和储存的时候应该将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

                                 
二、血清中包含絮状沉淀该怎么处理？
   血清中沉淀物的出现有许多种原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。

   若欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不使用过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。 

三、如何避免血清中产生沉淀？按如下操作可避免沉淀的产生：
1、解冻胎牛血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，实验显示非常容易产生沉淀物。 

2、解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

3、请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。 

4、勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破
坏，从而影响血清的品质。

5、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 

6、若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。 

四、培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？
   一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

五、为什么要热灭活血清？
   加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学 研究，培养es细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

六、细胞培养中出现黑点是污染吗？如何处理？
   一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

   如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：
1、细胞生长过老，破碎的细胞残骸；
2、血清质量不好，反复冻融的结果；
3、配制培养基的ph值偏高，不宜细胞生长；
4、配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点；
5、培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

七、细胞培养中如何防止黑点？
1、尽可能地减少血清冻融次数。
2、培养基无需37℃水浴。
3、培养基保持ph值7.0- 7.2。
4、严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。
5、掌握细胞传代的时机，细胞切勿生长过老。

八、血清保存和使用须注意：
   血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时?，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。

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