我们知道,ELISA的每项步骤都进行完善优化后,让实验达到状态也是必然的事了。那么关于ELISA包被条件如何优化呢?上海沪鼎给您一个的答案:
1.包被抗原的选择
包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。天然蛋白需经纯化 才能用直接吸附法包被,对于含杂质较多的抗原可以采 用间接捕获法包被(先用能 够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上,再通过特异性反应使抗原固 相化)。经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板。小分子 抗原比如多肽以及一些小分 子有机化合物,由于分子量太小,往往难于直接吸附在酶标板上,一般都先使其与 无关蛋白质如BSA等偶联,偶联物吸附于固相载体上。
2.包被液的选择
一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液,如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话 ,也可以使用pH7.2的磷酸 盐缓冲液。
3.包被温度的选择
通常是4-8度条件下过夜或者37度保温2小时,我们强烈建议4-8度条件下包被, 有利于蛋白活性的保 持。
4.包被浓度的选择
包被的zui适浓度随固相载体和包被物的性质变化,一般蛋白质的包被浓度为1- 5ug/ml,要明确针对特定包 被抗原的zui适包被浓度需要通过实验来确定。
另外还有一个相关重点问题值得讨论,包板后需要封闭吗?应该选择什么样的 封闭体系?上海沪鼎技术员特别说明:封闭是否必要,取决于ELISA的模式及具体的 实验条件。一般说来,双抗体夹心法,只要酶标记物是高活性的,操作时洗涤* ,不经封闭也可得到满意的结果。而在间接法测定中,封闭一般是*的。
公司为广大客户提供高质量的免疫学和生命科学相关产品。质量可靠,被全国各大院校科研机构认可并为ELISA试剂盒标准品对照品长期供应商之一。我们将以专业执着,精益求精的精神服务于广大科研用户。
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