本试剂盒仅供研究使用。 96T
药品名称：
通用名：犬传染性肝炎病毒酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒定性测定犬血液、或其它相关组织中传染性肝炎病毒。
实验原理：
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中传染性肝炎病毒。用纯化的
传染性肝炎病毒抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中传染性肝炎病毒抗原相结合，
经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP 标记的传染性肝炎病毒抗体结合，形成抗
体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转
化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD
值），与CUTOFF 值相比较，从而判定标本中犬传染性肝炎病毒的存在与否。
试剂盒组成：
1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶
2 酶标试剂6ml×1/瓶8 阳性对照0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板12 孔×8 条9 阴性对照0.5ml×1 瓶
4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份
5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张
6 显色剂B 液6ml×1 瓶12 密封袋1 个
标本要求：
1．标本处理：血清、血浆标本可直接检测
2．标本按要求制备后尽早进行实验。如不能及时检测，可将标本在-20℃保存一个月，
但应避免反复冻融。
3．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1
孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照（标准品）50μl。然后在待测
样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，
尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml 后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.15
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品OD 值< 临界值（CUT OFF）者为传染性肝炎病毒阴性
阳性判定：样品OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为传染性肝炎病毒阳性
注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M 的硫酸，使用时必须
注意安全。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
