人涎腺腺样囊性癌细胞，Acc-3细胞-化工 返回列表页

人涎腺腺样囊性癌细胞，Acc-3细胞培养注意事项：
1．传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。
2．每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
3．如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BSS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗菌素，并经常更换培养基等。

冻存和复苏的方法：

细胞冻存前，仔细检查细胞冻存所需的仪器和试剂是否齐全：一般主要有：传代细胞单层、适宜生长液、灭活小牛血清、*溶液、7.5％NaHC03溶液、0.25％*溶液、标签用具：100ml方瓶（培养细胞用）、克氏瓶、红翻帽塞、吸管（10ml、lml）、细胞冻存管、二甲基亚砜、CO2孵箱、超挣台、倒置显微镜、2～8℃冰箱、-20℃冰箱、液氮罐

细胞冻存开：

1．细胞：选对数生*细胞，收集细胞24小时前换液一次。

2．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5×106/ml，离心去上清，吸入离心管中。

3．冻存液：先用培养液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。

4．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加1.5毫升细胞悬液。

5．封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生爆炸伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。

人涎腺腺样囊性癌细胞，Acc-3细胞复苏方法

1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。

2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。

3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮。

4．低速离心（500～1000转/分）5分钟，取上清后再重复用培养液漂洗、离心。

5．加入培养液适当稀释后，再移装入培养瓶中，置温箱培养，次日更换一次培养液后再继续培养。

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质量控制：本产品经过了细菌、真菌、霉菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体检测。
运输保存：采用干冰保存运输
用途：    本产品只提供给进一步的科研使用，不可应用于治疗等其他方面。

细胞冻存
１．将细胞消化下来，移入离心管离心，弃上清
２．准备冻存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培养基＋１０％ＤＭＳＯ（现用现配）
３．加１．５冻存液在离心管中，将细胞吹打均匀，移入冻存管内．
放入－２０度冰箱２－４小时后．再放入－８０度冰箱过夜，第二天放入液氮罐保存.

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