B95-8细胞，绒猴EBV 转化的白细胞-化工-上海博研生物工程研究中心

B95-8细胞，绒猴EBV 转化的白细胞培养注意事项：
1．传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。
2．每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
3．如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BSS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗菌素，并经常更换培养基等。

冻存和复苏的方法：

细胞冻存前，仔细检查细胞冻存所需的仪器和试剂是否齐全：一般主要有：传代细胞单层、适宜生长液、灭活小牛血清、*溶液、7.5％NaHC03溶液、0.25％*溶液、标签用具：100ml方瓶（培养细胞用）、克氏瓶、红翻帽塞、吸管（10ml、lml）、细胞冻存管、二甲基亚砜、CO2孵箱、超挣台、倒置显微镜、2～8℃冰箱、-20℃冰箱、液氮罐

细胞冻存开：

1．细胞：选对数生*细胞，收集细胞24小时前换液一次。

2．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5×106/ml，离心去上清，吸入离心管中。

3．冻存液：先用培养液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。

4．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加1.5毫升细胞悬液。

5．封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生爆炸伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。

B95-8细胞，绒猴EBV 转化的白细胞复苏方法

1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。

2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。

3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮。

4．低速离心（500～1000转/分）5分钟，取上清后再重复用培养液漂洗、离心。

5．加入培养液适当稀释后，再移装入培养瓶中，置温箱培养，次日更换一次培养液后再继续培养。

技术相关问答：
1. 如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，*MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。2. 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。4.可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生*的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
基本共性:
1、所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质及糖被构成的生物膜，即细胞膜。
2、所有的细胞都含有两种核酸：即DNA与RNA。
3、作为遗传信息复制与转录的载体。
4、作为蛋白质合成的机器—核糖体，毫无例外地存在于一切细胞内，核糖体，是蛋白质合成的机器，在细胞遗传信息流的传递中起重要作用。
5、所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂。
6、能进行自我增殖和遗传
7、新陈代谢
8、细胞都具有运动性，包括细胞自身的运动和细胞内部的物质运动

产品名称：

【细胞生长】：贴壁生长,在软琼脂中成簇生长，并可悬浮生长

【细胞传代】：1:3 传代

【细胞活力】：90％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

【细胞检测】：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

【细胞冻存】：液氮冻存（基础培养基+10%DMSO+20%FBS）

【细胞运输】：活细胞运输（T-25 flasks）

【细胞用途】：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗

培养条件：DMEM高糖培养基+10%的胎牛血清+1%双抗

来源有保障（世界*品牌），状态且传代次数好，经测试不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。每管含有细胞数>5×100000cells/ml，具有高品质、高纯度、高稳定性等特点，纯化技术保证产品性能。
运输方式：活细胞运输（T-25 flasks）。
细胞纯度：95%。
细胞来源：ATCC等。
包装：内层无菌自封袋，防压泡沫盒，外层防压保温气泡袋，说明书。

用途：本产品只提供给进一步的科研使用，不可应用于治疗等其他方面。

细胞冻存
１．将细胞消化下来，移入离心管离心，弃上清
２．准备冻存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培养基＋１０％ＤＭＳＯ（现用现配）
３．加１．５冻存液在离心管中，将细胞吹打均匀，移入冻存管内．
放入－２０度冰箱２－４小时后．再放入－８０度冰箱过夜，第二天放入液氮罐保存.