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下面我们来介绍下ELISA试剂盒的标本稀释原则:
*、标本的稀释原则:首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。zui后计算浓度时,稀释了“N"倍,标本的浓度应再乘以“N"。
第二、标准品的稀释原则:每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为100ng/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释100ng/ml,50ng/ml,25ng/ml,12.5ng/ml,6.25ng/ml,3.12ng/ml,1.56ng/ml. 样品稀释液直接作为标准浓度0ng/mL,临用前15分钟内配制。如配制50ng/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)100ng/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
第三、*标记抗体的稀释原则: 临用前以*标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl*标记抗体加990μl*标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
第四、辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
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