细胞支原体污染的一般情况及预防措施

    细胞株若受到细菌、真菌、支原体、或是特定病毒等之污染时，会严重的影响实验的结果。而细菌、真菌等之微生物污染时，较易自培养基等的外观变化察觉。但是若受到支原体之污染时，细胞之外观较无明显变化，但是其污染会造成细胞之生长速率缓慢、细胞产生病变之型态改变等等变化。

一、造成支原体高污染率的原因为： 
      1、支原体size 0.1~0.8 um，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 um） 
      2、支原体污染时，没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化 
      3、过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式 
      4、细胞流通间缺乏品管，造成实验室间的相互污染 
      5、研究或操作人员忽略污染问题

二、支原体污染了来源： 
      1、已受污染的细胞 
      2、操作人员的疏失 
      3、已受污染的培养基、血清 
      4、操作环境不良、实验器具不洁等

    由于支原体为人体口腔中之正常菌丛，实验室之操作人员的污染亦可能为污染源，须十分注意。而万一细胞已受支原体污染时，*的处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃，以免污染其它洁净的细胞株。但是若是坚持要作去除支原体污染，有以下几种方法，只不过结果会与原始的细胞特性有差异。

三、去除支原体污染：  
      1、抗生素处理：BM-cyclin（Roche），MRA（mycoplasma removal agent，ICN），Ciprofloxcin（Bayer），Enrofloxacin（Bayer） 
      2、Nucleic acid metabolites：5-bromouracil，Hoechst 33258，bromodeoxyuridine 
      3、Anti-sera

四、预防与控制方面可从以下各点加强注意：

      1、设备方面： 
      (1)、使用已作支原体测试ok之细胞株 
      (2)、于另一隔离之区域操作未知是否有支原体污染之细胞 
      (3)、使用不添加抗生素的培养基培养细胞 

      2、检测方面：定期以标准的支原体检测方法检测细胞、培养基、血清、ddH2O有否被支原体污染。

    实验操作人员之无菌观念与无菌操作技术之要求

五、支原体之检测---直接培养法

    原理：直接培养支原体于培养基中，观察其生长及菌落生成。

    特点：是目前zui直接与灵敏之步骤，亦是用来评估其它侦测新步骤之标准步骤。

    缺点：培养时间长，须3－5星期才能判断。有些支原体不能在培养基培养出来。需同时培养支原体株作为正反应对照组，可能会造成污染。

    支原体生长较慢，所以先在液体培养基培养1~2周增殖后，再培养于agar plate上。需至少培养3星期后，才可断定是否有支原体污染。所以整个测试需5个星期才知正确结果。