ELISA试剂盒这些实验诀窍你知道多少

ELISA试剂盒免疫酶技术便是用酶(如辣根过氧化物酶)符号已知抗体(或抗原)，然后与组织标本在必定条件下反应，假如组织中含有相应抗原(或抗体)，抗原抗体互相联络构成的复合物中所带酶分子遇到底物时，能催化底物水解、氧化或恢复，发作显色反应，这么就可以识别出标本抗原(抗体)分布的方位和性质，通过图像分析并可抵达定量的目的。
ELISA试剂盒免疫酶技术与免疫荧光技术
免疫荧光技术虽已广泛应用于免疫学的研讨与确诊，可是荧光抗体染色标本不能*保存，对组织细胞的纤细结构分辩不清，免疫酶技术则能打败上述缺少，符号免疫酶技术的敏感性更优于免疫荧光法，对白腊切片标本尤为适用，为免疫病理研讨拓荒了一条新途径，酶显色产品具有较高的电子密度，通过恰当处理还可以进行免疫电镜调查，免疫酶组化技术分为酶符号法与非符号抗体技术，前者是将酶通过交联剂联络在抗体分子上，构成酶符号抗体。后者是将酶作为抗原与相应的特异性抗体联接进行的免疫反应，称为非符号抗体酶技术。
ELISA试剂盒免疫酶技术运用酶催化底物反应的生物扩展效果，前进特异性抗原-抗体免疫学反应检查敏感性的一种符号免疫技术。该技术所用的酶请求纯度高、催化反应的转化率高、专一性强、性质安稳、来历丰盛、报价不贵、制备成的酶标抗体或抗原性质安稳，继续保存着它的活性部分和催化才干。在受检标本中不存在与符号酶相同的酶。其他它的相应底物应易于制备和保存，报价低价，有色产品易于测定，光吸收高。
ELISA试剂盒固相载体选用免疫酶技术
免疫酶技术的首要试剂为固相的抗原或抗体、酶符号的抗原或抗体和与符号酶直接相关的酶反应底物。可作固相载体的物质很多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的功用，抗体或蛋白质抗原吸附其上后保存正本的免疫活性。聚苯乙烯为塑料，可制成各种方法，在测定进程中，它作为载体和容器，不参与化学反应，加之它的报价低价，所以被遍及选用。
聚苯乙烯载体的形状首要有三种：小试管、小珠和微量反应板。小试管的特色是还能兼作反应的容器，终究放入分光光度计中比色。小珠一般为直径0.6cm的圆球，外表经磨砂处理后吸附面积大增加。如用特其他洗刷器，在洗刷进程中使圆珠翻滚淋洗，效果十分好。zui常用的载体为微量反应板，于ELISA测定的产品也称为ELISA板，用的标准板形是8×12的96孔式。为便于作少量标本的检查，有制成8联或l2联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA板相同。ELISA板的特色是可以一同进行大量标本的检查，并可在特定的比色计上敏捷读出效果。现在已有多种自动化仪器用于微量反应板型的ELISA检查，包括加样、洗刷、保温、比色等过程，对操作的标准化极为有利。
出色的ELISA板应该是吸附功用好，空白值低，孔底透明度高，各板之间和同一板各孔之间功用邻近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不相同和制作工艺的不相同，各种产品的质量差异很大。因此每一批号的聚苯乙烯制品在运用前须检查其功用。常用的检查方法为：以必定浓度的人IgG（一般为10ng／ml）包被ELISA板各孔后，每孔内参与恰当稀释的酶标抗人IgG抗体，保温后洗刷，加底物显色，中止酶反应后分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件，使各读数在0.8左右。核算全部读数的均匀值。全部单个读数与均匀读数之差应小于10%.与聚苯乙烯类似的塑料为聚氯乙烯。作为ELISA固相载体，聚氯乙烯板的特色为质软板薄，可切开，价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯对蛋白质的吸附功用比聚苯乙烯高，但空白值有时也略高。
为比较不相同固相在某一ELISA测定中的好坏，可用以下方法加以查验：用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和一个典型的阴性标本。将它们分别进行一系列稀释后，ELISA试剂盒在不相同的固相载体上按预定的ELISA操作过程进行测定，然后比较测定效果。在哪一种载体上阳性效果与阴性效果区别zui大，这种载体便是这一ELISA测定的zui合适的固相载体。
ELISA试剂盒除塑料制品外，固相酶免疫测定的载体还有两种材料：一是微孔滤膜，如**纤维素膜、尼龙膜等，这类测定方法将在本章“膜载体的酶免疫测定"中介绍。另一种载体是以含铁的磁性微粒制作的，反应时固相微粒悬浮在溶液中，具有液相反应的速率，反应结束后用磁铁招引作为分其他手法，洗刷也十分便当，但需配备特其他仪器。