ELISA试剂盒应用中显色、比色问题讲解

在ELISA试剂盒试验中各种酶标仪功能都会有所不同，所以在运用中应具体阅览说明书，再进行下一步操作。
自从20世纪60-70时代面世以来，ELISA试剂盒法得到*科研工作者的认可及推重，在欧美及中国取得很大的推行，尤其是国内生化范畴的长足发展。ELISA试剂盒有着性高、灵敏度高、特异性强等许多的长处，它在检测抗体、抗原等方面有很好的使用，深受广阔用户朋友的喜欢。然而，在试验过程中，也需求留意许多问题，特别是显色、比色问题。
显色是ELISA试剂盒中的zui后一步温育反响，此刻酶催化无色的底物生成有色的产品。反响的温度和时刻仍是影响显色的要素。在必定时刻内，阴性孔可坚持无色，而阳性孔则随时刻的延伸而呈色加强。恰当进步温度有助于加快显色进行。在定量测定中，参加底物后的反响温度和时刻应按规则力求。定性测定的显色可在室温进行，时刻一般不需求严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色恰当缩短或延伸反响时刻，及时判别。
ELISA试剂盒OPD（邻苯二胺）底物显色一般在室外温或37℃反响20-30分钟后即不再加深，再延伸反响时刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色，显色反响应避光进行，显色反响结束时参加停止液停止反响。OPD产品用硫酸停止后，显色由橙黄色转向棕黄色。
ELISA试剂盒MB（四甲基联苯胺）受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反响调查成果。但为确保试验成果的稳定性，宜在规则的恰当时刻阅览成果。TMB经HRP作用后，约40分钟显色达，随即逐步削弱，至2小时后即可*衰退至无色。TMB的停止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠（SDS）等酶抑制剂均可使反响停止。这类停止剂尚能使蓝色维持较长时刻（12-24小时）不褪，是目视判别的良好停止剂。此外，各类酸性停止液则会使蓝色转变成黄色，此刻可用特定的波长（450nm）测读吸光值。