影响ELISA试剂盒成果的原因及解决办法

ELISA试剂盒实验以灵敏度较高、特异性较好的特色得到了广泛的运用，但操作中的各个环节对实验的检测作用影响较大，如不留意，有可能导致显色不全、花板等成果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启示，进步实验质量。
下面剖析ELISA试剂盒实验操作中可能影响成果的原因，并给出相应的解决办法：
1 挑选试剂挑选质量的检测试剂，严厉依照试剂阐明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样可能原因：1）血清或血浆标本分离欠好即进行加样；2）手工操作中，加样板过多形成加样后放入孵箱前等待时刻过长；3）加完标本再加酶试剂时酶溅起孔外。解决办法：1）标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：有必要运用含抗凝剂的血液标本搜集管，采血后有必要当即颠倒*混合5-10次，放置一段时刻后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要储存，则置于-20℃的低温冰箱内。2)加样后及时放入孵箱。3)加酶试剂后用吸水纸在酶标板外表轻拭吸干。4)如果选用AT或其他全自动加样，挑选FAME或其他后处理仪器加酶试剂。5)标本较多时，请分批操作。
3 孵育可能原因：1)孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸腾，吸附于孔壁，难于清洗*；2)孵育时刻人为延伸，导致非特异性结合紧附于反响孔周围，难以清洗*。解决办法：1)贴封片或加盖；2)按阐明步骤严厉控制操作时刻。
4 洗板可能原因：1)选用手工洗板，孔与孔之间液体穿插。2)选用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不*；洗板针阻塞，抽吸不*；洗板不畅，导致洗板作用差。3)反响板过多形成洗板等待时刻长。解决办法：1)确保洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后在吸水纸上轻轻拍干；2)合理安排，或多用几台洗板机。
5 显色可能原因：1)显色剂制造后放置时刻过长或运用过期显色剂；2)加显色剂时溅起孔外形成液体回流。解决办法：1)显色剂尽量在临用前制造，坚持不期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不必；2)加样时坚持显色剂不外流；3)A、B液应防止触摸金属器械。
6 停止可能原因如加停止液时发生较多气泡，导致假阳性添加。所以在加停止液时应防止发生气泡。
7 读板如读板时板底不清洁等。应确保酶标板清洁。
所以在整个操作过程中确保酶标板不触摸次氯酸;尽可能完成ELISA试剂盒检测规范自动化，有效进步检测质量。
ELISA试剂盒在实际操作中，除了挑选试剂外，有必要严厉依照操作步骤进行操作，一起作好室内质控、室间质评，以谨慎的工作作风检测每一份标本，才干确保检测质量。现在国内已有适当数量的单位具有全自动酶标仪，这关于完成ELISA规范化检测、进步检测质量起到了重要作用。