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技术文章

间接法测抗体的几大要点

阅读:180发布时间:2017-4-5

 1.酶标抗抗体工作浓度的选择

(1)用100ng/ml人IgG进行包被,洗涤。

(2)将酶标抗人IgG用稀释液作一系列稀释后分别加入已包被的孔中,保温、洗涤。

(3)加底物显色。加酸终止反应后,读取吸亮度(A),绘制曲线如图15-10。读取A值在1.0时的酶标抗体稀释度,作为酶标抗体的工作浓度。该酶标抗人IgG的工作浓度应为1/1600。

2.棋盘滴定法选择包被抗原工作浓度

(1)用包被液将抗原作一系列稀释后进行包被,洗涤。

(2)将强阳性参考血清、弱阳性参考血清和阴性参考血清用稀释液作1:100稀释,加样,保温,洗涤。

(3)加按工作浓度稀释的酶标抗人IgG抗体,保温,洗涤。

(4)加底物显色。加酸终止反应后读取A值。

(5)选择强阳性参考血清的A值为0.8左右、阴性参考血清的A值小于0.1的包被抗的的稀释度作为工作浓度。表15-1为本例的测定结果,表中数字为A值。从表中可见1:200为zui舒适的工作浓度。


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