上海晶抗生物工程有限公司
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阅读：230发布时间：2017-4-10
ELISA原理与分类
一、ELISA的原理
ELISA的根底是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶符号。在固相载体外表的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶符号的抗原或抗体既保存其免疫学活性，又保存酶的活性。在测守时，受检标本（测定其间的抗体或抗原）与固相载体外表的抗原或抗体起反响。用洗刷的办法使固相载体上构成的抗原抗体复合物与液体中的别的物质分隔。再参加酶符号的抗原或抗体，也经过反响而在固相载体上。此刻固相上的酶量与标本中受检物质的量呈必定的份额。参加酶反响的底物后，底物被酶催化变成有色产品，产品的量与标本中受检物质的量直接有关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。因为酶的催化功率很高，直接地扩大了免疫反响的成果，使测定办法到达很高的敏感度。
二、ELISA的类型
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定办法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；（2）酶符号的抗原或抗体，称为"物"（conjugate）；（3）酶反响的底物。根据试剂的来历和标本的状况以及检查的具体条件，可规划出各种不一样类型的检查办法。用于临床查验的ELISA首要有以下几种类型：
1.双抗体夹心法测抗原
双抗体夹心法是检查抗原zui常用的办法，操作进程如下：
1）将特异性抗体与固相载体联合，构成固相抗体。洗刷除掉未的抗体及杂质。
2）加受检标本，保温反响。标本中的抗原与固相抗体，构成固相抗原抗体复合物。洗刷除掉别的未物质。
3）加酶标抗体，保温反响。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体。*洗刷未的酶标抗体。此刻固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量有关。
4）加底物显色。固相上的酶催化底物变成有色产品。经过比色，测知标本中抗原的量。
2.双抗原夹心法测抗体
反响形式与双抗体夹心法相似。用特异性抗原进行包被和制备酶物，以检查相应的抗体。与直接法测抗体的不一样之处为以酶标抗原替代酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因而其敏感度相对高于直接法。乙肝标志物中抗HBs的检查常选用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原构造的不一样，寻觅合适的符号办法。
3.直接法测抗体
直接法是检查抗体常用的办法。其原理为使用酶符号的抗抗体（抗*抗体）以检查与固相抗原的受检抗体，故称为直接法，操作进程如下：
1）将特异性抗原与固相载体联合，构成固相抗原。洗刷除掉未的抗原及杂质。
2）加稀释的受检血清，保温反响。血清中的特异抗体与固相抗原，构成固相抗原抗体复合物。经洗刷后，固相载体上只留下特异性抗体，血清中的别的成份在洗刷进程中被洗去。
3）加酶标抗抗体。可用酶标抗人Ig以检查总抗体，但通常多用酶标抗人IgG检查IgG抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体，然后直接地符号上酶。洗刷后，固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正有关。
4）加底物显色本法首要用于对病原体抗体的检查而进行流行症的确诊。
直接法的长处是只需改换包被抗原就可使用同一酶标抗抗体树立检查相应抗体的办法。直接法成功的关键在于抗原的纯度。尽管有时用粗提抗原包被也能获得实践有用的成果，但应尽可能予以纯化，以进步实验的特异性。特别应注意除掉能与通常健康人血清发作反响的杂质，例如以 E.Coli为工程酶的重组抗原，如其间富含E.Coli成份，很可能与受过E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗体发作反响。抗原中也不能富含与酶标抗人Ig反响的物质，例如来自人血浆或人体安排的抗原，如不将其间的Ig去掉，实验中也发作假阳性反响。别的如抗原中富含无关蛋白，也会因竟争吸附而影响包被作用。直接法中另一种搅扰要素为正常血清中所含的高浓度的非特异性。患者血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强，非特异IgG可直接吸附到固相载体上，有时也可吸附到包被抗原的外表。因而在直接法中，抗原包被后通常用无关蛋白质（例如牛血清蛋白）再包被一次，以关闭（blocking）固相上的空闲空隙。别的，在检查进程中标本须先行稀释（1:40~1:200），以防止过高的阴性本底影响成果的判别。
4.竞赛法测抗体
当抗原材猜中的搅扰物质不易除掉，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检查特异性抗体。其原理为标本中的抗体和必定量的酶标抗体竞赛与固相抗原。标本中抗体量越多，在固相上的酶标抗体愈少，因而阳性反响呈色浅于阴性反响。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有搅扰物质，直接包被不易成功，可选用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后参加抗原，构成固相抗原。洗刷除掉抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞赛反响。竞赛法测抗体有多种形式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞赛，抗HBc ELISA通常选用此法。另一种形式为将标本与抗原一起参加到固相抗体中进行竞赛，洗刷后再参加酶标抗体，与在固相上的抗原反响。抗HBe的检查通常选用此法。
5.竞赛法测抗原
小分子抗原或半抗原因缺少可作夹心法的两个以上的位点，因而不能用双抗体夹心法进行测定，能够选用竞赛法形式。其原理是标本中的抗原和必定量的酶标抗原竞赛与固相抗体。标本中抗原量含量愈多，在固相上的酶标抗原愈少，zui终的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。
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