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ELISA试剂盒是免疫诊断中的一项新技术,也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。
elisa分析检测试剂盒操作步骤
1.首先将抗人IgMbt链抗体于碳酸盐缓冲液中40c下过夜包被聚苯乙烯等固相,形成固相抗体,洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭,洗涤去除未结合的部分及杂质。
2.加入含待测IgM抗体的临床样本如血清等,温育一定时间后洗板;此时,大鼠ELISA试剂盒待测样本中的IgM抗体就会与固相上的抗P链抗体反应而吸附于固相上。
3.加入特异的抗原如HAV抗原、HBcAg等,温育一定时间后洗板;此时,特异抗原就会与固相上的特异IgM抗体发生反应。
4.加入酶标记的抗特异抗原的抗体,温育一定时间后洗板;此时,在固相上即形成相应的抗原抗体复合物。
因此,如不对血清样本稀释,就直接检测,即使是没有非特异IgM的干扰,阳性测定结果也没有急染的诊断价值。现在,有些试剂生产厂家,为了迎合临床实验室减轻劳动强度、大鼠ELISA试剂盒简便操作的要求,生产了不需对样本进行稀释的抗HAVIgM和抗HBclgMELISA试剂盒,现有不少实验室也在使用。鉴于上面提到的原因,我们建议临床实验室在做抗HAVIgM和抗HBc lgM等类检测时,应使用对样本进行稀释的试剂盒,以保证检测的临床价值。
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