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ELISA试剂盒技术测定单克隆抗体操作步骤
①抗原包被:兔抗人IgG 作为抗原,用包被液l:8000稀释,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板
中。4℃放置过一夜。
②洗涤:次日倾去凹孔内的液体,洗涤液洗3次。
③封闭:加l00μL/孔封闭液,室温放置0.5h。
④洗涤:用洗涤液洗3次。
⑤加待测样品(一抗):将含单克降抗体的细胞培养上清在另—块板上用PBS 连续稀释(按照1:2或1:10),100μL /孔加到已包被的板上,每个样品平行做两份,PBS 或空白培养基作为阴性对照,已知样品作为阳性对照。加盖37℃恒温箱温育1~2h。
⑥洗涤:用洗涤液洗3次。
⑦加酶标抗抗体:兔抗鼠IgG-HRP,用封闭液l :8000稀释,100μL/孔,加盖37℃恒温箱温育1h。
⑧洗涤:用洗涤液洗5次,蒸馏水洗2次。
⑨显色:加新鲜配制的底物溶液100μL/孔,室温暗处放置5~30min,显示蓝色。
⑩终止反应、比色:加50μL/孔终止液.颜色变黄;用酶标仪测定450nm 处各孔的吸光值,阳性反应的大稀释度为待测样品的效价。
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