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土壤漆酶微量法检测试剂盒

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所  在  地上海市

更新时间:2022-04-27 16:09:45浏览次数:128次

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货号 GOY-01S6874
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商品属性:

产品名称

土壤漆酶微量法检测试剂盒

规格

100管/48样

检测方法

微量法

货号

GOY-01S6874

商品介绍:

测定意义

漆酶(Laccase)是一种含铜的多酚氧化酶,属于铜蓝氧化酶家族,广泛分布于真菌和高等植物中,具有较强的氧化还原能力,在纸浆生物漂白,环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。

测定原理

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基,在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS,测定ABTS自由基的增加速率,可计算得漆酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、常温离心机、可见分光光度计、微量石英比色皿、震荡仪。

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg1克瓶装,每瓶140000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50100μl湿润管壁,可抗凝人血35ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔510分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置12小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

用于测定。

双特异性蛋白26抗体(丝裂原活化蛋白激8)Human PPP2R4(Serine/threonine-protein phosphatase 2A activator) ELISA Kit人刚地弓形虫(T.gondii)ELISA试剂盒,T.gondii ELISA

阿米洛利结合蛋白1抗体Human PPME1 (Protein phosphatase methylesterase 1) ELISA KIT人5羟色(5-HT)ELISA试剂盒,5-HT ELISA

S期激活化蛋白DBF4A抗体Human PSKH1 (Serine/threonine-protein kinase H1) ELISA KIT人雌(E)ELISA试剂盒,E ELISA

着丝粒相关蛋白DSN1抗体Human PTH1R(PaRathyroid hormone/paRathyroid hormone-related peptide receptor) ELISA Kit人乌头酸2(ACO-2)ELISA试剂盒, ACO-2 ELISA

双皮层蛋白结构域蛋白DCDC2抗体Human PARG (Poly(ADP-ribose) glycohydrolase) ELISA KIT大鼠促性腺释放受体(GnRHR)ELISA试剂盒,

神经干树突调节蛋白DAGLα抗体Human NKAP(NF-kappa-B-activating protein) ELISA Kit兔子内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒,

对接蛋白4抗体Human PTPRCAP (Protein tyrosine phosphatase receptor type C-associated protein) ELISA KIT钩端螺旋体IgM(Lebtospira)ELISA试剂盒--动物,人

DULLARD蛋白抗体Human PACRGL (PACRG-like protein) ELISA KIT溶血性链球

土壤漆酶微量法检测试剂盒兔子(CS)免疫试剂盒进口、组装

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操作步骤:

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。

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