对虾桃拉病毒（TSV）核酸检测试剂盒方法厂家 返回列表页

组成及试剂配制:
1、对虾桃拉病毒(TSV)核酸检测试剂盒方法厂家酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

样本采集、存放及运输：
1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（多冻融3次）；
3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。
【标本要求】
人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管（含0.4ml灭菌生理盐水），用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。标本可立即用于检测，也可保存于-20℃待测。
【检验方法】
1.标本、对照品的核酸裂解处理
用商品化（取得医疗器械许可证）的RNA提取试剂盒处理标本，具体操作参见该试剂盒说明书。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l样品置于1.5ml 离心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次； 13000rpm离心15min， 吸取上层液体，加入等体积异丙醇，颠倒混匀室温静置10min， 13000rpm离心10min，轻轻倒去上清；加入700?l 75%乙醇，颠倒洗涤，13000rpm离心5min，轻轻倒去上清，倒置于吸水纸上，弃尽液体或4000rpm离心5sec，将管壁上的残余液体甩到管底部，用微量加样器尽量吸干液体，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.试剂配制
取n×19?l H7N9核酸荧光PCR检测混合液与n×1?l RT-PCR酶（n为反应管数）,振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。
3.加样取上述混合液20?l置于PCR管中，然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5?l分别加入PCR管中，盖好管盖，立即进行PCR扩增反应。
4. PCR扩增反应管置于定量荧光PCR仪上，推荐循环参数设置：
45℃×10min; 95℃×15min;循环一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循环45次;单点荧光检测在60℃，反应体系为25?l。
荧光通道检测选择：选用FAM通道。

ALP ELISA Kit17号染色体开放阅读框53抗体碱性磷酸酶(ALP)ELISA试剂盒

BATF ELISA Kit17号染色体开放阅读框57抗体碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样蛋白(BATF)ELISA试剂盒

bFGF-9 ELISA Kit17号染色体开放阅读框64抗体碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISA试剂盒

bFGF-6 ELISA Kit17号染色体开放阅读框66抗体碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)ELISA试剂盒

bFGF-4 ELISA Kit17号染色体开放阅读框74抗体碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)ELISA试剂盒

bFGF ELISA Kit17号染色体开放阅读框75抗体碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA试剂盒

MSLN ELISA Kit17号染色体开放阅读框77抗体间皮素(MSLN)ELISA试剂盒

ALK ELISA Kit17号染色体开放阅读框78抗体间变性淋巴瘤激酶(ALK)ELISA试剂盒

ITIH1 ELISA Kit维甲酸调节核基质相关蛋白抗体间α-胰蛋白酶抑制因子重链H1(ITIH1)ELISA试剂盒

ITIH4/IHRP/ITIHL1/PK120/PRO1851 ELISA Kit17号染色体开放阅读框42抗体间-alpha-胰蛋白酶抑制剂重链H4(ITIH4/IHRP/ITIHL1/PK120/PRO1851)ELISA试剂盒

TAb ELISA Kit17号染色体开放阅读框97抗体甲状腺素抗体(TAb)ELISA试剂盒

T4 ELISA Kit猫眼综合征染色体候选基因1抗体甲状腺素(T4)ELISA试剂盒

TG ELISA Kit猫眼综合征染色体候选基因6抗体甲状腺球蛋白(TG)ELISA试剂盒

TAb ELISA Kit21号染色体开放阅读框2抗体甲状腺抗体(TAb)ELISA试剂盒

TBG ELISA Kit9号染色体开放阅读框86抗体甲状腺结合球蛋白(TBG)ELISA试剂盒

THRb ELISA Kit21号染色体开放阅读框128抗体甲状腺激素受体β(THRb)ELISA试剂盒

TPO ELISA Kit6号染色体开放阅读框62抗体甲状腺过氧化物酶(TPO)ELISA试剂盒

THAA ELISA KitCCZ1蛋白抗体甲状腺非肽激素抗体(THAA)ELISA试剂盒

TSI ELISA Kit脑蛋白5抗体甲状腺刺激免疫球蛋白(TSI)ELISA试剂盒

PLP ELISA Kit21号染色体开放阅读框58抗体甲状旁腺激素样蛋白(PLP)ELISA试剂盒

PTHrP ELISA Kit20号染色体开放阅读框43抗体甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)ELISA试剂盒

PTH1R ELISA Kit9号染色体开放阅读框43抗体甲状旁腺激素1受体(PTH1R)ELISA试剂盒

PTH 1-34 ELISA Kit几丁质酶3样蛋白3抗体甲状旁腺激素1-34(PTH 1-34)ELISA试剂盒

PTH ELISA Kit趋化素样因子超家族成员2抗体甲状旁腺激素(PTH)ELISA试剂盒

AFP ELISA Kit趋化素样因子超家族成员2亚型1抗体甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA试剂盒

fMet ELISA Kit18号染色体开放阅读框1抗体甲酰甲硫氨酸(fMet)ELISA试剂盒

反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。