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原代细胞的培养技术分析

时间:2017/1/3阅读:326
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原代细胞的培养技术分析

原代培养(Primary Culture)也称初代培养,是指从体内或组织中取出的细胞直接进行培养,到*次传代的阶段,此阶段一般可持续1-4周。原代培养所获得的细胞培养物即为原代细胞。原代细胞可通过组织块培养直接长出单层细胞,也可用酶或机械方法将组织分散成单个细胞进行培养获得。在传代前的培养均可认为是原代培养,原代细胞一旦进行传代培养(Subculture),便改称为细胞系(Cell Line),而不再称为原代培养。原代培养Z大的优点是,组织和细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大变化,在一定程度上能反映体内状态。特别是在细胞培养会合时,原代培养的细胞其某些特殊功能表达尤为强烈,在这个培养阶段能更好地显示其与供体组织密切相关的形态学特征。在供体来源充分、条件稳定的情况下,采用原代培养做各种实验,如药物测试、细胞的分化发育和功能等效果会更好。但应注意,原代培养的细胞是异质的。由于原代细胞来源于多种细胞组成的组织,成分比较复杂,即使全为同一类型的细胞,如上皮细胞或成纤维细胞,仍具有异质性。此外,原代细胞的相互依存性强,而独立生存能力差,因而细胞克隆形成率很低。因此,在分析细胞的生物学特性时会比较困难。其次,由于供体的个体差异以及其他一些原因,细胞群的生长效果有时也不一致。

原代细胞也是建立各种细胞系(株)必经的阶段。假如原代培养能够维持几小时甚至更长,即可进行进一步筛选。有的细胞具有继续增殖能力,有的细胞类型只是存活而不会增殖;另有一些细胞只在特殊条件下被应用,此外细胞的类型与分布也会发生改变。在单层培养的情况下,细胞汇合以后,瓶底全部铺满,对密度有依赖性的细胞则由于接触抑制,生长逐渐减缓或停滞,而失去密度依赖性的细胞还会继续生长,天然或自发转化的细胞则过度生长。借助于频繁传代,保持细胞低密度生长,有利于保存细胞的正常表型(如小鼠成纤维细胞)。而自发转化则倾向于高密度的细胞过度生长。

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