如何正确使用酶结合物?

ELISA试剂盒实验原理

酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)原理

1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent 

assay，ELISA)用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成

液体标本中微量物质的测定方法。

大鼠ELISA试剂盒的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗

体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定

时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使

固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也

通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入

酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故

可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度

如何正确使用酶结合物?

1.酶结合物的稀释液

在稀释液中常加入高浓度的无关蛋白质(例如1%BSA或5%脱脂奶粉)，通过竞争抑制酶结合物在

固相载体上的非特异性吸附。一般还加入能够抑制蛋白质吸附于塑料表面的非离子型表面活性

剂，如吐温20(0.05%的浓度较为适宜)。

2.正确稀释酶结合物

酶结合物的合适工作浓度需要通过预实验来确定，浓度过高易导致本底偏高，浓度过低则会导

致阳性信号的减弱。

酶结合物在使用前稀释，稀释后的酶结合物不宜长期保存，因为低浓度的酶结合物极易失

活。