干细胞实体组织材料的分离方法

干细胞对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。
（一）   机械分散法
所取材料若纤维成分很少，如脑组织，部分胚胎组织可采用剪刀剪切、用吸管吹打分散组织细胞或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内（用九号针），使细胞通过针头压出，或在不锈钢纱网内用钝物压挤（常用注射器钝端）使细胞从网孔中压挤出。此法分离细胞虽然简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差。此法仅适用于处理纤维成分少的软组织。
 
（二）消化分离法   组织消化法是把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械
法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
 1、酶消化分离法  
酶消化分离法常采用胰蛋白酶和胶原酶，其分离方法如下：
（1） 胰蛋白酶分散技术  
 
胰蛋白酶（简称胰酶）是广泛应用的消化剂。胰蛋白酶是一种胰脏制品，对蛋白质有水介作用，主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键，使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开，在常
用的蛋白酶中由于产品的活力和纯度不同，对细胞的消化能力也不同，胰蛋白酶对细胞的作用，取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短
等。 
 ①细胞类型 胰蛋白酶适于消化细胞间质较少的软组织,能有效地分离肝、肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等。而对含结缔组织较丰富的组织,如滑膜、子宫、纤维肉瘤
、肿瘤组织等就无效，但若与胶原酶合用,就能增加其对组织的分离作用。
 ②酶的活力 市售的胰蛋白酶,其活力都经过测定而有效，但配制时必须新鲜，需保存在低温冰箱中，消化时的pH和温度都要适宜，否则会影响活力，细胞的分散直接与酶的活力有关，Z终使用活力为1:200或1:250，56℃pH8.0时活力Z强。该酶为粉剂，保藏时要防潮，室内温度不宜过高，保存时间不能太长，若粉剂结团块,说明该部分受潮或失效。 
③酶的浓度 胰蛋白酶一般采用的浓度为0.1%-0.25%（活力1:200或1:250）,但遇到难消化的组织时，浓度可适当提高，消化时间适当延长。浓度高对细胞有毒性，而较低浓度的胰蛋白酶在培养液中可促进细胞的增殖，若培养液中加入血清，其少量胰蛋白酶可被血清中抗胰蛋白酶因子所清除。  
④温度 一般认为胰蛋白酶在56℃时活性Z强，但由于对细胞有损害而不能被采用，常使用的温度为37℃，通常在37℃进行消化比室温作用快。  
⑤pH pH8~pH9是胰蛋白酶活力适宜范围，但随碱性的增加其活力也随之减少，活性强分散快，干细胞也容易被消化下来，消化分离细胞时PH只能选用7.6～8.0之间，否则对细胞有损伤。  
⑥无机盐离子 若用含有钙和镁的盐类溶液来配制胰蛋白酶时，可以发生抑制胰蛋白的消化作用。因此,在配制时应采用无钙镁离子的PBS配制。
⑦消化时间 如果细胞消化时间过长，可以损害细胞的呼吸酶，从而影响细胞的代谢，一般消化时间为20分钟为宜，冷消化时使用低浓度消化液，于4℃也可。 
Norethindrone Acetate     炔诺酮醋酸酯标准品    51-98-9     100mg
Mefloquine Hydrochloride     盐酸甲氟喹标准品    51773-92-3     100mg
Diatrizoic Acid    泛影酸标准品    50978-11-5    100mg
Hexacosanol    二十六碳醇标准品    506-52-5     100mg
Estriol    雌三醇标准品    50-27-1    100mg
Erythrosine Sodium    四碘荧光素钠标准品    49746-10-3    100mg
Rimexolone    瑞美松龙标准品    49697-38-3     100mg
Metronidazole     甲硝唑标准品    443-48-1     100mg
    奥昔布宁相关物质A标准品    4335-77-7     100mg
Fenbendazole     苯硫咪唑标准品    43210-67-9     100mg
干细胞