干细胞转化实验技术：形态学检测法

 当机体受到抗原的刺激时，干细胞就可以转化为淋巴母细胞，进一步转化为致敏淋巴细胞。这种转化在一定的程度上代表着机体的细胞免疫功能状态。这种转化也可在体外的T细胞的培养过程中加入适当的刺激原而出现，并表现出形态上的变化。目前常采用PHA诱发的淋巴细胞转化试验作为检查机体细胞免疫的功能状态。具体方法有形态学检查法。

（一）操作方法 
1． 于培养瓶内加0.2ml马血，对照组与试验组各做2瓶，试验组均加PHA 30?g； 
2．37℃培养72h，每天轻摇1~2次； 
3．取出培养瓶，摇散血，倒入离心管，3 000r/min离心10min，去上清液； 
4．用血球泥制备推片，晾干； 
5．以瑞氏染液染2min~3min，加等量缓冲液，混匀继续染3min，蒸馏水冲洗后再用姬姆萨染液染2min~3min。加等量缓冲染液感作7min~8min，馏水冲洗，晾干； 
6．镜检，观察，计数。 
（二）注意事项 
1．培养液Z适pH为7.2~7.4，过酸过碱都会影响细胞的生长而降低转化率。培养液的类型与动物的白细胞有关，如小鼠的淋转试验，用RPMI-1640，用199液则不成功。 
2．培养时间 以72h~120h转化率Z高，超过这个时间，则转化率反而下降。 
3．吞噬细胞有时在形态上易与“过渡型"混淆。但巨噬细胞有其固有的特点，核占细胞比较小且偏一边，核染色质浓集，细胞浆呈蓝灰色或红褐色，胞浆内有大小不等的颗粒或吞噬物，且含有大小不等的气泡。 
4．涂片要少蘸些细胞，推出尾部来，因淋巴细胞较大，易集中在尾部及边缘。 
5．观察干细胞转化，染色不要太浓，以便观察核仁。 
6．严格的无菌操作，是淋巴细胞转化试验成功的关键。

100316-200402 检查用 30mg 枸椽酸他莫昔芬E－异构体

100317-200902 HPLC法含量测定 100mg 倍他环糊精

10318－200602 含量测定 100mg 卡托普利

10319－200602 检查用 50mg 卡托普利二硫化物

100320-200401 含量测定 30mg 卡前列甲酯

100322-200101 含量测定 50mg 卡铂

100323-200201 检查用 100mg 氯氮平

100324-200001 含量测定 50mg 林旦

100325-200901 HPLC含量测定 100mg 氯碘羟喹

100326-200201 含量测定 50mg 联苯苄唑
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