呕吐毒素免疫亲和柱，简便快速操作性强-化学试剂 返回列表页

　　脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol， DON) 又称呕吐毒素(vomitoxin)，主要是由镰刀菌的某些种产生的化学结构和生物活性相似的有毒代谢产物——单端孢霉烯族化合物中的一种。广泛存在于*，主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物，也污染粮食制品，人和动物在误食被该毒素污染的粮谷类后可以产生广泛的毒性效应。DON*的毒性作用是引起呕吐、腹泻、腹痛等症，并延缓生长、降低免疫机能，与贫血、免疫抑制、食管癌、克山病也具有密切联系。给人、家畜的健康造成巨大威胁。

　　【产品用途】

　　脱氧雪腐镰刀菌烯醇(又称呕吐毒素，简称DON)免疫亲和柱适合于和HPLC、LC-MS及DON酶免分析试剂盒结合使用，定量检测DON。适用于谷物、饲料等样本中的DON净化处理，提高了样品的纯度，纯化后的提取液可用不同的分析方法测定。

　　【测定原理】

　　本产品测定的基础是抗原抗体反应，抗呕吐毒素(DON)的单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的DON经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过DON免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，DON与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。后采用甲醇洗脱DON，然后进行相关分析。

　　【试剂配制】

　　0.1%吐温20-PBS溶液：将0.1%吐温20-PBS粉末(厂家提供)直接用900mL水全部溶解后，用HCl或NaOH调pH至7.4，后用水定容至1L。

　　5M NaOH溶液：称取20g NaOH，溶于100mL水中。

　　【样品制备】

　　----准确称取25g(精确至0.01g)粉碎的样品，加入5g聚乙二醇8000，并与125mL水混合，摇床振荡提取15min;

　　----用快速定性滤纸过滤或4000r/min，离心5min;对于pH低于6.0的玉米加工副产物及饲料等的滤液或上清液，需要用5M NaOH调pH至7.0左右，并用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用;

　　----准确移取2.5mL混匀滤液(相当于0.5g样品)过亲和柱。

　　【亲和柱净化】

　　注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥!

　　----3mL柱管取出上方堵头，减去上堵头螺纹下突出部分，插回柱子上，另一端与20mL针筒固定后使用;将1mL柱管上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上(柱管内偶见有小气泡属正常现象，不影响亲和柱的使用);

　　----准确移取上述混匀滤液，注入针筒中，调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过免疫亲和柱;

　　----用20mL 水冲洗柱子(对于饲料及玉米加工副产品等颜色较深的样液，先用10mL 0.1%吐温20-PBS清洗，再用10 mL 10%甲醇-水冲洗柱子，后用10mL水冲洗柱子。)，流速1秒/滴，弃去流出液，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体;

　　----准确加入1.5mL甲醇(色谱级)洗脱，流速自然重力，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液，进行相关测定。

　　【注意事项】

　　(1)呕吐毒素对人体有害，应戴手套操作。凡接触到标样的玻璃器皿都要用5%次氯酸钠浸泡过夜。

　　(2)不要使用过有效期的免疫亲和柱。

　　(3)免疫亲和柱应在2~8℃保存。不要冷冻。

　　(4)使用前，免疫亲和柱需至少提前半小时回温至室温(25℃左右)。

　　(5)HPLC液相测定值、试剂盒计算值接近zui高检出值时，样本的实际含量可能大于柱容量而造成流穿，建议减少上样体积重新过柱。

　　(6)称取的样品量以及提取液的体积可根据实际情况按比例调整，建议低不少于10g样。

　　【保质期】

　　有效期为12个月。

　　生产日期见包装盒。