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强推ELISA试剂盒检测新原理

阅读:269发布时间:2018-1-24

ELISA试剂盒检测法是免疫确诊中的一项新技术,现已成功地运用于多种病原微生物所致使的盛行症、寄生虫病及非盛行症等方面的免疫确诊。也已运用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,依据现已运用的效果,以为ELISA法具有活络、特异、简略、敏捷、安稳及易于自动化操作等特征。不只适用于临床标本的查看,并且由于一天以内能够查看几百甚至上千份标本,因而,也适合于血清盛行病学查询。本法不只能够用来测定抗体,并且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种前期确诊的超卓方法。因而ELISA法在生物医学各领域的运用规划日益扩展。
ELISA试剂盒检测可概括四个方面:
A.?定量查看体液中抗原或抗体成份。
B.?研讨抗酶抗体的构成。
C.?闪现微量的免疫沉淀反响。
D.免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
ELISA试剂盒检测中,进行各项试验条件的挑选是很首要的,其间包括:
1)酶符号抗体作业浓度的挑选:首先用直接ELISA法进行开始效价的滴定(见酶符号抗体部份)。然后再固定其它条件或采用“方阵法”(包被物、待检样品的参看品及酶符号抗体分别为不一样的稀释度)在正式试验系统里地滴定其作业浓度。
2)包被抗体(或抗原)的挑选:将抗体(或抗原)吸附在固相载体外表时,央求纯度要好,吸附时一般央求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多选用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不一样的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相一同,查询阳性标本的OD值。挑选OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。关于大都蛋白质来说一般为1~10μg/ml。
3)固相载体的挑选:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方法能够是凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体,在运用前均可进行挑选:用等量抗原包被,在同一试验条件下进行反响,查询其显色反响是不是均一性,据此判明其吸附功用是不是超卓。

 


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