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ELISA试剂盒试剂制造研讨办法

阅读:78发布时间:2017-11-13

完整的ELISA试剂盒包括以下各组分:已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);酶标记的抗原或抗体(结合物);ELISA试剂盒酶的底物;阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参阅标准品和操控血清(定量测定中);酶联物(结合物)及标本的稀释液;洗刷液;酶反响终止液。ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。
ELISA试剂盒疫吸附剂已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)枯燥的前提下一般可保存6个月以上。可作ELISA中载体的资料良多,zui常用的是聚苯乙烯。ELISA试剂盒以含铁的磁性微粒作为ELISA固相载体,反响后用磁铁的吸引进行分离,洗刷利便,ELISA试剂盒一般均配以特别仪器。为比较不同固相在某一ELISA测定中的好坏,可应用如下的实验:用其他免疫学测定办法选出一个典型的阳性标本和阴性标本,将它们进行一系列稀释后,在不同的固相载体上按预订的ELISA操纵进程进行测定,然后比较成果。小试管还能够当作比色杯,ELISA试剂盒zui终直接放入分光光度计中比色。直接包被的抗原经固相抗体的亲和层析作用,包被在固相上的抗原纯度大大前进,因而含杂质较多的抗原也可选用捕捉包被法,实验的特异性、敏感性均由此得以改进,重复性亦佳。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的机能,抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍留存本来的免疫学活性,加之它的价格低廉,所以被遍及选用。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是经过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体外表的疏水基团间的作用力。操控反响前提,使各孔读数在吸光度0.8左右。一切单个读数与悉数读数的均数之差,应小于10%。例如,在检测抗DNA抗体时,需用DNA作为包被抗原,而遍及的固相载体一般不能直接与核酸结合。ELISA板的特色是能够一起进行大量标本的检测,并可在特制的比色计上迅速读出成果。换言之,包被等于抗原或抗体结合到固相载体外表的进程。在哪一种载体上阳性成果与阴性成果差别zui大,这种载体就是这一ELISA测定项目的zui合适的固相载体。
ELISA载体的外形主要有三种:微量滴定板、小珠和小试管。杰出的ELISA板应该是吸附机能好,空缺值低,孔底透明度高,ELISA试剂盒各板之间、统一板各孔之间、统一板各孔之间机能相近。再者,球型小珠的外表弧度更有利于吸附的抗原决定簇或抗体结合位点的暴出面处于反响状况,因而珠式ELISA的反响往往更为灵敏。IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力,其联结多发生在Fc段上,抗体结合点露出于外,因而抗体的包被一般均选用直接吸附法。 
ELISA试剂盒小试管作为固相载体也有较大的吸附外表,并且标本的反响量也相应添加。在ELISA中,用作固相载体的小珠一般为直径0.6cm的圆珠,外表经磨砂处理后吸附面积大大添加。当抗原决定簇存在于或临近于疏水区域时,抗原与固相载体的直接吸附可使抗原决定簇不能充沛露出,在这种情况下,直接包被作用欠安,能够选用直接的捕捉包被法,ELISA试剂盒即先将针对该抗原的特异抗体作预包被,这以后经过抗原抗体反响使抗原固相化。ELISA试剂盒聚氯乙烯对蛋白质的吸附机能比聚苯乙烯高,但空缺值也略高。固相载体先用碱性蛋白质,如聚赖氨酸、*等作预包被,也可前进核酸的结协力。作为ELISA固相载体,聚氯乙烯的特色为质软板薄,可剪割,价廉,但光洁度不如聚苯乙烯板,孔底亦不如聚苯乙烯平坦。

 


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