虾肝肠微胞虫探针法荧光定量PCR试剂盒数据处理分析

虾肝肠微胞虫探针法荧光定量PCR试剂盒数据处理

1. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品RNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。

2. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 35，则为阳性。

注意事项：
建议加样顺序是阴性质控品、待检样本、阳性质控品。4. PCR扩增（扩增区）
1)     仪器设置（以ABI Prism 7500为例）
将PCR反应管放入PCR仪内，按照对应顺序设置阴性质控品(NTC)、阳性质控品(Standard)及待检样本(Unknown)。Reporter Dye为FAM，Quencher Dye为None，参比染料(Passive Reference)为None。
2 ）   扩增程序