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RNase-free EDTA Solution

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所  在  地上海市

更新时间:2021-08-02 11:43:01浏览次数:70次

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RNase-free EDTA Solution运输及保存:低温运输,-20℃保存,有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时,由于其浓度较高,一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。

产品特点:

高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

参数规格:
产品名称:RNase-free EDTA Solution
产品分类:RNA/DNA提取试剂盒
货号:CP100572
产品规格:详见说明
产品运输:低温运输
产品保存:-20保存
产品有效期:一年储存条件:
14
或-20样品收集、处理及保存方法
1.
血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.
血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3.
细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4.
组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5.
保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验方法步骤:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix 
2mM             
4 μl     
引物110pM                 
2 μl     
引物210pM                 
2 μl     Taq
 2U/μl               
1 μl     DNA
模板(50ng-1μg/μl  
1 μl      
ddH2O 50 μl  
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2
:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93 40s →58 30s → 72 60s,循环30-35次,在72 保温7min
注意事项:
加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物AB液时,避免使用带金属部分的加样器
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

使用方法:
一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 6 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
1.
标记 6 个离心管,分别为 765432
2.
用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液,*用带芯枪头,下同)。
3.
7 号管中加入 5 μL 阳性对照(浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4.
换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5.
换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6.
重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7.
用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8.
如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)
9.
如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于PCR 阳性对照。

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