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dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存

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更新时间:2017-07-17 13:05:22浏览次数:174次

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dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。

dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存详细说明书:

dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存产品及特点:
易错 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下:本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发,本产品具有下列特点:
1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化,突变率稳定,突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% ±0.13%),详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单,但如果在 PCR 引物中设计位点,则可使产物克隆到表达载体,也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物,对于 1kb 以上的产物,建议分段扩增。
dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存变性温度与时间:
模板变性温度是决定 PCR 反应中双链 DNA 解链的温度,达不到变 性温度就不会产生单链 DNA 模板,PCR 也就不会启动。变性温度低则变性不*, DNA 双链会很快复性,因而减少产量。变性温度太高,又会影响酶的活性。一般情况 下可设为 94 20~30 秒,高温时间应尽量缩短,以保持耐热 DNA 聚合酶的活力, 高变性温度不宜超过 95 退火温度与时间:退火温度决定 PCR 特异性与产量。温度高特异性强,但过高则引物 不能与模板牢固结合.
dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存DNA 扩增效率下降;
温度低产量高,但过低可造成引物与模板 错配,非特异性产物增加。合适的退火温度一般在 45~68之间。设置特定反应的 适退火温度,可根据引物的(G+C%含量进行推测,一般实验中退火温度比扩增引 物的熔解温度 Tm 5,退火时间一般为 30~60 秒,足以使引物与模板之间*结 合,长时间退火没有必要。
dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存使用方法:
1. 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例,如果反应体系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中,加入下列成分:易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自备,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 补水到 30 uL
2.
按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR(循环数与突变率的关系见下表),然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件,一般可以先尝试下面的 PCR 条件: PCR 前变性 94 3 分钟易错 PCR 94 1 分钟 45 1 分钟 循环 30 次(见注) 72 1 分钟注:易错 PCR 一般不需要热启动,也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
15-keto Prostaglandin E2 1 mg     915-dioxo-11α-hydroxy-prosta-5Z13E-dien-1-oic acid 15-keto PGE2 15-keto Prostaglandin E2

Ritalinic Acid 50 mg     α-

腐胺(10GM     Putrescine Dihydrochloride 333-93-7 MW 161.08

4Z),7Z-Decadienoic Acid-d5 1 mg     4Z7Z-deca-47-dienoic-99’,101010-d5 acid 4Z),7Z-Decadienoic Acid-d5

S-nitnoso-L-glutathione 50 mg     N-N-L-gamma-glutamyl-S-nitnoso-L-cysteinyl-glycine GSNO S-nitnoso-L-glutathione

Methyl -5-((2-t-butylcarbamothioylhydrazonomethyl-1-24-difluorophenyl-1H-pyrazole-4-carboxylate     CID 2745687
PtdIns-345-P3 12-dipalmitoyl sodium salt 1 mg     1-12R-dihexadecanoylphosphatidylinositol-345-trisphosphate tetrasodium salt Phosphatidylinositol-345-triphosphate C-16|DPPI-345-P3 PtdIns-345-P3 12-dipalmitoyl sodium salt

TAK-632 5 mg     N-[5-[[7-cyano-2-[cyclopropylcarbonylamino]-6-benzothiazolyl]oxy]-2-fluorophenyl]-3-trifluoromethyl-benzeneacetamide

CP 80633 10 mg     5-[3-[1S2S4R-bicyclo[221]hept-2-yloxy]-methoxyphenyl]tetrahydro-2-1H-pyrimidinone CP 80633

BAY-11-7085 50 mg     3-[[4-1,1-dimethylethylphenyl]sulfonyl]-2E-propenenitnile

Fast Green FCF 5 g     N-ethyl-N-[4-[[4-[ethyl[3-sulfophenylmethyl]amino]phenyl]4-hydroxy-2-sulfophenylmethylene]-25-cyclohexadien-1-ylidene]-3-sulfo-benzenemethanaminium disodium salt NSC 379443 Fast Green FCF

DiaEasy Dialyzer (15 ml) MWCO 12-14 kDa     DiaEasy Dialyzer (15 ml) MWCO 12-14 kDa
13R-HODE cholesteryl ester 50 ug     13R-xy7noxy-9Z11E-octadecadienoic acid cholesteryl ester 13R-HODE cholesteryl ester

LAQ824 5 mg     Dacinostat|NVP-LAQ824 2E-N-xy7noxy-3-[4-[[2-xy7noxyetxyl[2-1H-indol-3-yletxyl]amino]metxyl]pxenyl]-2-propenamide

DiSBAC30111     DiSBAC30111

Levetiracetam 100 mg     (αS-etxyl-2-oxo-1-pyrrolidineacetamide UCB-L 059|Kea Levetiracetam

Dihomo-γ-Linolenic Acid etxyl ester 500 mg     8Z11Z14Z-eicosatrienoic acid etxyl ester etxyl DGLA Dihomo-γ-Linolenic Acid etxyl ester

3-Decanone 5-xy7noxy-1-4-xy7noxy-3-metxoxypxenyl- 5S- 5-xy7noxy-1-4-xy7noxy-3-metxoxypxenyl-3-decanone     6-Gingerol
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