elisa定量检测试剂盒实验常见问题及解决方法

elisa定量检测试剂盒实验常见问题及解决方法
一、选择试剂
选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。二、加样
可能原因：
1）血清或血浆标本分离不好即进行加样；2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）；3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法：
1）标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒*混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟;若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。2）加样后及时放入孵箱。3）加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。4）如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。5）标本较多时，请分批操作。
三、孵育
可能原因：
1）孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*;2）孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。
解决办法：
1）贴封片或加盖；2）按说明步骤严格控制操作时间。
四、洗板
可能原因：
1）采用手工洗板，孔与孔之间液体交叉。2）采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不*；洗板针堵塞，抽吸不*;洗板不畅，导致洗板效果差。3）反应板过多造成洗板等待时间长。
解决办法：
1）保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；2）合理安排，或多用几台洗板机。
五、显色
可能原因：
1）显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；2）加显色剂时溅出孔外造成液体回流。
解决办法：1）显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；2）加样时保持显色剂不外流；3）A、B液应避免接触金属器械。
六、终止
可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
七、读板
如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸；尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。