摘要

反相色谱法（Reverse Phase Chromatography, RPC）是分离大多数常规样品的分离模式，该模式一般比其他色谱模式的普适性更好，令人满意的分离度也让反相色谱法成为zui广泛应用的纯化方法。然而反相色谱法对于亲水性化合物却不能很好的分离，使用普通的反相色谱柱，这类亲水化合物都难以有效地保留。而Hilic柱（参见图1）对于这类化合物不仅有合适的保留时间，还有令人满意的分离度。

图1 C18柱和Hilic柱的固定相

常州三泰科技公司的SepaFlash^® Hilic柱与快速液相制备色谱系统SepaBean^TM machine结合有着优越的分离性能，本文比较了SepaFlash^® Hilic柱与SepaFlash^® C18柱在反相模式下对于两种强极性化合物的分离效果，实验结果表明SepaFlash^® Hilic柱有着的分离效果，为此类化合物的分离纯化提供了一套且实用的解决方案。

实验

本文所采用的快速分离柱规格为25g SepaFlash^® Hilic柱以及25g SepaFlash^® C18柱，样品为胞嘧啶和*的混合物（结构式参见图2），在上样量*相同的条件下，利用快速液相制备色谱系统SepaBean^TM machine（参见图3）进行分离纯化，实验结果清楚的说明了两种色谱柱对于高极性化合物的不同选择性。

图2 两种强极性化合物（A：胞嘧啶；B：维生素C）

图3. 快速液相制备色谱系统SepaBean^TM machine[申请试用]

实验参数设置如表1所示：

结果与讨论

根据分离图谱，我们能准确测得保留时间与峰宽，可用公式计算相应的分离度：

R = 1.18 (t₂ - t₁) / [(W_1/2)₁ + (W_1/2)₂]

式中t₁与t₂分别为相邻谱峰的保留时间，(W_1/2)₁与(W_1/2)₂是半峰高处测得的峰1和峰2的峰宽。根据公式分别计算图4和图5中相邻谱峰的分离度，SepaFlash^® C18柱中相邻谱峰的分离度R≈1.53，SepaFlash^® Hilic柱中相邻谱峰的分离度R≈5.97。通过计算分离度可以看出，SepaFlash^® Hilic柱的分离度要远远超过SepaFlash^® C18柱。

图4  SepaFlash^® C18柱对混合物的分离图谱

图5  SepaFlash^® Hilic柱对混合物的分离图谱

实验结果表明，SepaFlash^® Hilic柱表现出了的选择性，成功地保留和分离了胞嘧啶和*的混合物。根据分离图谱可以看出，即使在SepaFlash^® C18反相柱上以高达95%的水溶液流动相来分离，这两种强极性化合物也只有很弱的保留，并且混合物样品没有得到基线分离。对比C18反相柱的分离结果，我们可以看到混合物样品在SepaFlash® Hilic柱上不仅有合适的保留时间，而且有理想的分离度。因此，本文中的方法为强极性化合物的快速分离纯化提供了一套且实用的解决方案。

关于SepaFlash® 亲水性色谱柱

SepaFlash^®亲水性色谱柱包括一系列预装有不同填料的色谱柱，如Hilic柱、氰基柱（-CN）、氨基柱（-NH₂）和二醇柱（-Diol）等（参见表2和图6），为分离纯化强亲水性或者强极性的化合物提供了多种选项。

*注：上述固定相均具有5.0g，20g，33g，48g，105g，155g，300g及420g的规格，具体参数请查询公司上的订购信息。

图6. SepaFlash^® 亲水性色谱柱产品

关于SepaBean^TM Machine 

SepaBean™ machine是三泰科技（常州）有限公司经过全体科研人员，共同努力开发的一款快速液相制备色谱系统，拥有国家保护。除了常规的分离纯化功能外，还具备强大的学习能力和数据共享功能，为科研工作者挑战更多更复杂的分离纯化难题助力。

（本文作者为CBG应用技术研究中心：王玉麟，孙文，徐波，有任何疑问，都可以和我们一起探讨）