液相色谱仪始于60年代前,但是真正被大众所注意的时候已经是60年代后期,不管是理论还是技术,那是一个具有标志性的年代。液相色谱仪开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为经典液相色谱仪法,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。液相色谱仪法是在经典液相色谱仪法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱仪法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱仪法。又因分析速度快而称为高速液相色谱仪法。也称现代液相色谱仪。
液相色谱仪的指标很多,有泵的、检测器的、色谱柱等等。我们认为要看主要技术指标,根据国家标准,仪器的主要指标有噪音,漂移,zui小检测浓度,定性定量重复性等。这些指标都要放在系统,回路里去看,去比较。就是需要把各单元装置都要联接好,如接好色谱柱,进样阀,并且要通上流动相。因为您在分析中也都是联接好以后才可以进行分析的,而不是单单用个检测器或是泵的。 液相色谱仪法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为经典液相色谱仪法,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。液相色谱仪法是在经典液相色谱仪法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱仪法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱仪法。又因分析速度快而称为高速液相色谱仪法。也称现代液相色谱仪。
液相色谱仪法以液体为流动相常见的有以下几种:
1.高压:液相色谱仪法以液体为流动相(称为载液),液体流经色谱柱,受到阻力较大,为了迅速地通过色谱柱,必须对载液施加高压。一般可达150~350×105Pa。
2. 高速:流动相在柱内的流速较经典色谱快得多,一般可达1~10ml/min。液相色谱仪法所需的分析时间较之经典液相色谱仪法少得多,一般少于 1h 。
3. :近来研究出许多新型固定相,使分离效率大大提高。
4.高灵敏度:液相色谱仪已广泛采用高灵敏度的检测器,进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外,用样量小,一般几个微升。
5.适应范围宽:气相色谱法与液相色谱仪法的比较:气相色谱法虽具有分离能力好,灵敏度高,分析速度快,操作方便等优点,但是受技术条件的限制,沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而液相色谱仪法,只要求试样能制成溶液,而不需要气化,因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于 400 以上)的有机物(这些物质几乎占有机物总数的 75% ~ 80% )原则上都可应用液相色谱仪法来进行分离、分析。 据统计,在已知化合物中,能用气相色谱分析的约占20%,而能用液相色谱仪分析的约占70~80%。
通过逐渐改变液相色谱仪分析条件,在保证物质分离度的前提下,让难流出的物质加速流出,以提高分析效率的方法;不同点,程序升温只能从低柱温逐步升高,只能改变升温的速率,而梯度洗脱可以使用多种溶剂,采用复杂的比例变化来达到满意的分离效果,更灵活 4,应该是:减小填料粒径,增加色谱柱长,使用尽量大小均一、外型规则的填料,使用合适的流速,使用合适的流动相组成,使用合适的固定相。不能依靠理论塔板数来判断分离的可能,理论塔板数描述的是液相色谱仪柱柱效,塔板数越高,说明色谱柱的分离性能越好(一个宽泛的概念),但具体到某些物质能否互相分离,液相色谱仪应该用分离度来描述,两个物质的分离度大于1.5,说明能互相分离,否则就不能,这个跟理论塔板数毫无关系.