商品介绍:
测定意义 LDH(EC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶,催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应,伴随着NAD+/NADH之间互变。 测定原理 LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。 需自备的仪器和用品 可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 |
特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。
产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
乳酸脱氢酶(LDH)测试盒可见分光光度法 | 可见分光光度法 | 50管/24样 | BJ-016113-2 |
测定步骤:
1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。
2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。
3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)
4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。
5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)充分混匀,室温静置30min后,450nm处测定各管吸光值A。
注意事项:
待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。
一个试剂盒如果不能在3次内使用完毕,其中的WST-8需要在使用时适当分装,以避免反复冻融导致的检测效果下降。
标准品稀释时所用的稀释液应尽量与样品一致。样品用试剂盒提供的SOD样品制备液制备时,标准品也宜使用SOD样品制备液进行稀释;当样品为血液等无需处理的样品时,宜使用试剂盒提供的SOD检测缓冲液稀释标准品。
抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色,如果设置了使用说明中的空白对照3,就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。
实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
优点如下:
1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。
2、取样量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可测红细胞中的SOD,只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD,0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。
3、灵敏度高:IC50=0.05g/ml,是邻苯三酚法的18倍。
4、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
5、再现性好:变异系数CV=1.7%。
6、回收试验: X =103.3%。
7、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
8、测试面广:可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等,效果均佳。
跨膜蛋白TMED4抗体固氮菌COLO 320DM(人结直肠腺癌)
甲状腺激素受体相关蛋白3抗体黄赭色链霉菌WI-38(人胚肺)
味觉受体蛋白家族2亚基9抗体双孢蘑菇THP-1(人髓系白血病单核)
肥大类β2鹿角芝Hep B1.2(人肝癌)
磷酸化激酶B抗体黄青霉NCI-H460(人肺癌)
粘附分子1抗体污黑腐皮壳Ishikawa(人内膜癌)
跨膜蛋白16A/钙激活氯离子通道抗体副猪嗜血杆菌SK-MES-1(人肺鳞癌)
肿瘤坏死因子-α抗体多带革孔菌NCI-H838(人非小肺癌)
肿瘤蛋白P53诱导蛋白11抗体卡尔斯伯酵母TG-905(人脑胶质母瘤)
味觉2型受体蛋白家族49抗体隆纹黑蛋巢菌NCI-H1975(人肺腺癌)
早期未分化视网膜及晶状体蛋白EURL抗体葡萄球菌属WISH(人羊膜)
特异激酶底物蛋白抗体粪肠球菌BGC-803(人胃癌)
微管相关同源蛋白TPX2抗体胜利油田盐单胞菌SPC-A-1(人肺癌)
神经死亡诱导蛋白激酶抗体脊孢糖多孢菌A2(人腺样囊性癌)
微管蛋白β tubulin抗体 Tubulin β毛栓菌VCaP(人前列腺癌)
乳酸脱氢酶(LDH)测试盒可见分光光度法解旋酶样转录因子(HLTF)试剂盒Anti-CHEK2 AntibodyPHD指蛋白21A
胆固(CH)试剂盒 Anti-CHI3L1 Antibody富含蛋白11
血栓调节蛋白(TM)试剂盒Anti-CHEK2 Antibody(PB0732)三磷酸腺苷受体受体P2X3
抑瘤素M受体(OSMR)试剂盒Anti-CHM Antibody相关血浆蛋白A
角蛋白17(CK17/KRT17)试剂盒 Anti-CHM Antibody棕榈酰蛋白硫酯酶1
乳酸脱氢酶C(LDHC)试剂盒 Anti-CHRM1 Antibody磷酸化
乙酰A乙酰转移酶2(ACAT2)试剂盒 Anti-CHRM1 Antibody核仁同源蛋白17