使用方法:
收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中,37℃温浴3min左右;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入*培养液终止消化;
3) 用吸管轻轻吹打混匀,按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的*培养基至5mL,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中培养;
4) 待细胞*贴壁后,培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。
公司细胞现货供应,质量有保证、*、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供最新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
产品名称 | 大鼠冠状动脉成纤维细胞 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
分类 | 原代细胞 |
货号 | GOY-01X1428 |
商品介绍:
名称 大鼠冠状动脉成纤维细胞 2.组织来源:冠状动脉 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 大鼠冠状动脉成纤维细胞分离自冠状动脉组织;冠状动脉是供给心脏血液的动脉,起于主动脉根部,分左右两支,行于心脏表面。采用Schlesinger等的分类原则,将冠状动脉的分布分为三型:右优势型、均衡型、左优势型。左右冠状动脉是升主动脉的第一对分支。左冠状动脉为一短干,发自左主动脉窦,经肺动脉起始部和左心耳之间,沿冠状沟向左前方行后,立即分为前室间支和旋支。前室间支沿前室间沟下行,旋支绕过心尖切迹至心的膈面与右冠状动脉的后室间支相吻合。它是构成冠状动脉壁的主要细胞成分,细胞膜上分布着多种离子通道,如电压依赖性Na+通道、多种Ca2+通道和K+通道;它们参与了静息电位的维持与细胞膜电位的复极化、超极化,调节血管平滑肌的收缩及舒张功能,此外动脉粥样硬化的发展也涉及冠状动脉平滑肌细胞增殖、炎症及凋亡等。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化;成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁*,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。 5.方法简介: ()实验室分离的大鼠冠状动脉成纤维细胞采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: ()实验室分离的大鼠冠状动脉成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-R327 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态成纤维细胞样 传代特性可传2-3代左右;2代以内状态最佳 消化液0.25% 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
SUPT16H/CDC68 染色体特异性转录延伸因子抗体 规格: 0.2mlHIF-1 Alpha 缺氧诱导因子1α 抗体HIF-1α 规格: 0.1ml
phospho-DES (Thr76/Thr77) 磷化结抗体 规格: 0.1ml
ASB9 含锚重复序列-细胞因子信号抑制物盒家族9抗体 规格: 0.2ml
Goat Anti-human IgM 羊抗人IgM 规格: 1mg
phospho-TCF3/E2A/E47(Ser39) 磷化转录因子3抗体 0.1mlCXCL16 CXC趋化
大鼠冠状动脉成纤维细胞改良马丁液体培养基 进口、国产Martin Broth ,Modified用于菌苗制造及生物制品霉菌无菌检验250山羊释放激素(GnRH)免疫试剂盒*直销
改良马丁琼脂培养基 进口、国产Martin Agar Medium ,Modified用于生物制品霉菌无菌检验250山羊促生长激素释放激素(GHRH)免疫试剂盒进口、组装
霉菌培养基进口、国产Mould Medium用于生物制品霉菌无菌试验(GB标准)250山羊促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)免疫试剂盒进口、分装
营养琼脂(NA) 进口、国产Nutrient Agar细菌总数测定,细菌传代培养250山羊促肾上腺皮质激素(ACTH)免疫试剂盒现货供应
四号琼脂基础 进口、国产No.4 Agar Base用于霍乱弧菌的选择性分离,后加亚碲酸钾250山羊促卵泡素(FSH)免疫试剂盒*直销
SS 琼脂 进口、国产Salmonella-Shigella Agar选择性培养基,用于沙门氏菌,志贺氏菌的选择性分离250山羊促甲状腺素(TSH)免疫试剂盒进口、组装
伊红美蓝琼脂(EMB) 进口、国产Eosin-Methylene Blue Agar弱选择性培养基,用于肠道菌的选择性分离250山羊雌激素(E)免疫试剂盒进口、分装
三糖铁琼脂(TSI) 进口、国产Triple Sugar Iron Agar用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选(葡萄糖,乳糖,蔗糖)250山羊雌二醇(E2)免疫试剂盒现货供应
XLD 琼脂 进口、国产Xylose Lysine Desoxycholate Agar选择性培养基,用于志贺氏菌的选择性培养(FDA标准)250山羊超氧化物歧化2,线粒体(SOD2)免疫试剂盒*直销
MH 肉汤(MHB) 进口、国产Mueller-Hinton Broth用于抗生素敏感试验250山羊超氧化物歧化1,可溶性(SOD1)免疫试剂盒进口、组装