服务流程:
公司产品仅用于科研接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 | 规格 | 货号 |
肠道病毒68型检测试剂盒(荧光PCR法) | 50T | YS-P013844 |
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
兔巨噬集落激因子受体(MCSFR)2-(羟)-18-冠6-(>93.0%(GC))磷酸化Src原癌因抗体
兔V-Myc骨髓瘤病癌因同源物(MYC)4'-并-15-冠-5-(>99.0%(GC))STAC2蛋白抗体
兔信号传导转录激活因子5A(STAT5A)4'-并-18-冠-6-(>97.0%(GC))转录因子SOX30抗体
兔白介素3介导核因子(NFIL3)1,4,8,11-四氮杂环十四烷(>98.0%(T))13号染色体开放阅读框32抗体
兔τ-蛋白激酶1(τPK1)1,4,7-三氮杂环壬烷三盐酸盐(>98.0%(N)(T))线粒体相关富含半胱氨酸蛋白抗体
兔神经丝蛋白3(NEF3)1,4,8,12-四氮杂环十五烷(>97.0%(T))跨膜接头蛋白SIT抗体
兔髓样前体抑制因子2(MPIF2)1,5,9-三氮杂环十二烷(>90.0%(GC))SKAP55蛋白抗体
兔纤维蛋白原α(FGα)1,4,7-三氮杂环壬烷(>98.0%(GC))沉默调节相关蛋白2抗体
兔激肽原1(KNG1) 1,4,7--1,4,7-三氮杂环壬烷(含稳定剂碳酸氢钠)肿瘤/抗原11.2抗体
兔结缔组织生长因子(CTGF) 1,4,8,11-四硫代环十四烷(>98.0%(GC))平滑肌蛋白抗体
兔半乳凝集素7(GAL7)1,4,7-三硫杂环壬烷(>98.0%(GC))SHROOM1蛋白抗体
兔表皮生长因子受体(EGFR)1,4,8,11-四氮杂环十四烷-1,4,8,11-四酸四酯(>97.0%(GC))磷酸化沉默调节蛋白1抗体
兔解整合素金属蛋白酶10(ADAM10) 1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三酸三叔丁酯(>93.0%(N))SCK蛋白抗体
兔素相关蛋白A(CAPA) 1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四酸三叔丁酯(>97.0%(T))磷酸钠协同转运蛋白抗体
兔REST协阻抑因子3(RCOR3)4-叔丁杯[8]芳烃(>98.0%(HPLC))精氨酸结合蛋白2抗体
兔赖氨酰氧化酶样蛋白4(LOXL4)4-叔丁杯[4]芳烃(>98.0%(HPLC))唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素1抗体
肠道病毒68型检测试剂盒(荧光PCR法)TPSB2/Tryptase Beta2/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠肥大类胰蛋白酶β2IgG3-双(2-羟)氨-2-羟磺酸 超纯级
MCT1/FITC 荧光素标记单羧酸转运蛋白-1抗体IgG麦芽三糖,水合 95%
MDM2/FITC 荧光素标记双微体2癌因抗体IgG蓝四氮唑 超纯级
Phospho-MDM2 (Ser166) /FITC 荧光素标记磷酸化双微体2癌因抗体IgGCAPSO单钠盐 99%
Mdr-1/FITC 荧光素标记多药耐药蛋白抗体IgG3-(环已)-1-磺酸 ≥98.0%
Measles virus of fusion protein/FITC 荧光素标记抗麻疹病抗体IgG3-(环己)-1-磺酸 超纯级
MEF2A/FITC 荧光素标记肌增强因子2抗体IgG3-(环已)-2-羟-1- 99%
Phospho-MEF2A (Thr312) /FITC 荧光素标记磷酸化肌增强因子2抗体IgG3-(环已)-2-羟-1- 99.5%
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。