服务流程:
公司产品仅用于科研接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 | 规格 | 货号 |
猪种特异性基因检测试剂盒(荧光PCR法) | 50T | YS-P014103 |
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
绵羊c-sis 生物素偶联血蓝蛋白
绵羊皮肤桥蛋白(DPT) 生物素偶联牛血清白蛋白
绵羊性T淋巴相关抗原4(CTLA4) BK通道蛋白多肽
绵羊巨噬炎性蛋白5(MIP-5)重组人骨形态发生蛋白-2
绵羊信号传导转录激活因子6(STAT56)重组人骨形态发生蛋白7
绵羊电子转移黄素蛋白β肽(ETFβ) 炭疽杆菌菌体蛋白
绵羊胰腺再生蛋白3α(REG3α)CD105蛋白
绵羊胎蛋白(αFP) 瓜氨酸环肽
绵羊肌联蛋白抗体(TTN) C-反应蛋白(抗原)
绵羊生长分化因子9(GDF9)克仑特罗偶联牛血清白蛋白
绵羊糖链抗原153(CA153) 克仑特罗偶联血蓝蛋白
绵羊血小板相关抗体IgM(PA-IgM) 畸胎瘤衍化生长因子抗原(表皮生长因子相关肽)N端
绵羊腺苷脱氨酶(ADA) 角蛋白19多肽抗原
绵羊突触核蛋白α(SNCα) 人癌胚抗原抗原
绵羊红生成素受体(EPOR) CD105/转化生长因子β受体抗原
绵羊血管紧张素II受体1(ANG II R1) 半胱酸蛋白酶蛋白-6(抗原)
猪种特异性基因检测试剂盒(荧光PCR法)Cdc34 peptide 周期调控因子34抗原利福平 97%
CDK1 (Cyclin-Dependent Kinase 1) 周期素依赖性激酶1抗原异戊 >99%(GC)
CDK5(Cyclin Dependent Kinase 5) 周期素依赖性激酶5抗原异戊 CP,98%
CDK6 (Cyclin Dependent Kinase 6) 周期素依赖性激酶6抗原1-Boc-3-吡咯烷酮 97%
CDK7/Cyclin H/MAT1 周期素依赖性激酶7抗原1-Boc-3-羟吖丁啶 97%
CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8) 周期素依赖性激酶8抗原1,1,2,2-四氯烷 AR,98%
Cdkn1c/p57/Kip2 (Cyclindependent kinase inhibitor 1C) 周期蛋白依赖激酶抑制因子1C抗原1,1,2,2-四氯烷 CP,96%
CGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 ) 软骨糖蛋白39(多肽)1,1,2,2-四氯烷 Standard for GC